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主题：【讨论】同一样品不同仪器测试结果相差20nm？

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jcshao
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发表于：2010/04/28 19:53:50 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
同一样品在不同仪器上测试其发射光谱，相同激发光，发射光谱相差20nm，怎么回事？
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zhouyuhu
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2010/4/28 21:04:34 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这个差别也太大了吧
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jidzhang
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2010/4/29 8:40:45 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
肯定是一个仪器有问题，建议拿标样看看是哪个出了问题。
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pfz1985
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2010/4/29 8:46:41 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
仪器肯定有问题，建议调试下，最好是用一种仪器检测
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jixf_1114
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2010/4/29 10:30:13 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这个是有可能的，即使是同一厂家的两台仪器，一台经过响应校正，一台没有，得到的结果是没有可比性的。主要是激发光在不同波长下能量不一致，PMT对不同波长的响应不一致，光路中光栅及各反光镜对不同波长的反射率不一致，造成仪器不同波长的响应不一致。只有在经过响应校正后得到的数据才是样品的真实数据，这个数据才可以与其他型号厂家的仪器结果比较，但前提是其他仪器也经过相同的校正
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jcshao
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2010/4/30 10:29:20 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢大家的回复，但还有个问题，另外一种样品在这两个仪器上测试，出了分辨率不同外，主峰都相近。
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3kkk
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2010/4/30 14:46:33 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
仪器出问题了吧
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fragr
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2010/4/30 21:14:59 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 jcshao(jcshao) 发表:
谢谢大家的回复，但还有个问题，另外一种样品在这两个仪器上测试，出了分辨率不同外，主峰都相近。


如果在红光区，差别会很大有可能，紫外可见区差别应该小一些。

建议：
1、两台仪器是否能确认波长准确性？
2、是否都有了校正文件？
3、请排除其他的干扰峰。
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jcshao
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2010/5/1 16:29:55 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 fragr(fragr) 发表:

如果在红光区，差别会很大有可能，紫外可见区差别应该小一些。

这是为什么？
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hwzhou10
hwzhou10
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2010/5/3 22:31:03 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你的样品是什么？ 是不是有光变化呢？
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prime
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2010/5/4 17:29:20 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
发射光谱相差20nm是指2台仪器的发射峰扫描有 20nm位移吗？
你可以先排除样品的变化，在两台仪器上多次反复扫描样品，看扫描图谱是否一致，如有条件也可再配一次样品看看。

在确定样品没有问题后，再讨论仪器是否正常，有个比较简单的测试方法，我们可以作水的拉曼散射实验，激发波长调至365nm扫描，在发射波长414nm可以得到拉曼散射，如果2台仪器的结果都在414nm附近，可以认为波长基本没大问题。否则可能要仪器工厂检修了。
你的这个实验，对于未做过仪器能量归一化的荧光分光光度计，确实可能有一定波长位移 ，尤其是对于发射光谱宽的样品。
荧光发射光谱一般都很宽，有几十甚至上百纳米，如果你的样品扫描峰很宽，峰值位置不很明显（比如在荧光峰附近30-50nm范围，荧光值都差不多大）。不同仪器能量不一致就显得很突出。
在红光区影响更大的原因是，荧光分光光度计的光电检测器采用光电倍增管（PMT）为多，光电倍僧管在红外的衰减非常大，器件在此区域的一致性较差。所以，在红光区（一般在650以后）仪器若不做归一化，一致性确实会比较差。其实，对于分光光度计，在波长的两端，一致性都是会差点的
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