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透射电镜（TEM）

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主题：【基础知识】生物透射样品制样基本流程

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shxie

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发表于：2005/10/24 20:27:00 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

开一个帖子，因为很多人问制样的过程，欢迎大家提供自己的制样流程资料:)
先贴一个超薄切片的流程图，主要针对生物样品：

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2005/10/24 20:31:00 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

透射电镜生物样品制备步骤

一．取材：
组织块小于1立方毫米
二．固定：
2.5%戊二醛，磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。
用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分三次
1%锇酸固定液固定 2-3小时
用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分三次
三．脱水：
50%乙醇 15-20分
70%乙醇 15-20分
90%乙醇 15-20分
90%乙醇 90%丙酮（1：1） 15-20分
90%丙酮 15-20分
以上在4度冰箱内进行
100%丙酮    室温    15-20分三次
四．包埋：
纯丙酮+包埋液（2：1）室温 3-4小时
纯丙酮+包埋液（1：2）室温过夜
纯包埋液    37度 2-3小时
五．固化：
37度烘箱内    过夜
45度烘箱内    12小时
60度烘箱内    24小时
六．超薄切片机切片 50-60 nm
七．3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色
八．透射电镜观察。拍片

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2005/10/25 17:58:00 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 shxie 发表:
透射电镜生物样品制备步骤

一．取材：
组织块小于1立方毫米
二．固定：
2.5%戊二醛，磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。
用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分三次
1%锇酸固定液固定 2-3小时
用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分三次
三．脱水：
50%乙醇 15-20分
70%乙醇 15-20分
90%乙醇 15-20分
90%乙醇 90%丙酮（1：1） 15-20分
90%丙酮 15-20分
以上在4度冰箱内进行
100%丙酮    室温    15-20分三次
四．包埋：
纯丙酮+包埋液（2：1）室温 3-4小时
纯丙酮+包埋液（1：2）室温过夜
纯包埋液    37度 2-3小时
五．固化：
37度烘箱内    过夜
45度烘箱内    12小时
60度烘箱内    24小时
六．超薄切片机切片 50-60 nm
七．3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色
八．透射电镜观察。拍片