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主题：【第三届原创参赛】普洱生茶与熟茶的液质联用分析及模式识别

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发表于：2010/07/20 09:54:51 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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普洱生茶与熟茶的液质联用分析及模式识别

Pattern recognition applied to LC-MS/MS profiles of polyphenols and caffeine in Pu-Er raw tea and Pu-Er ripe tea

摘要：采用液质联用技术及高效液相色谱法对普洱生熟茶中的主要成分进行定性和定量分析。鉴定出普洱茶水溶液中8种主要成分，分别为没食子酸（GA）、没食子酸儿茶素（GC）、表没食子酸儿茶素（EGC），儿茶素（C），表儿茶素（EC），表没食子酸儿茶素没食子酸酯（EGCG），表儿茶素没食子酸酯（ECG）和咖啡因（CAF）。建立这8种成分HPLC含量测定方法，方法学考察结果良好。以这8种成分的含量为指标，对普洱生茶和熟茶各20批进行主成分分析、聚类分析和判别分析，能准确的区分普洱生茶与熟茶，可信度高。为普洱生熟茶的鉴定及品质研究提供了科学依据。

关键词：普洱生茶；普洱熟茶；HPLC；LC-MS/MS；聚类分析；主成分分析；判别分析

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引言

普洱茶是历史以来形成的云南特有的地方名茶。普洱生茶是以符合普洱茶产地环境条件下生长的云南大叶种茶树鲜叶为原料，经杀青、揉捻、日光干燥、蒸压成型等工艺制成的茶，包括散茶及紧压茶。普洱熟茶是以符合普洱茶产地环境条件的云南大叶种晒青茶为原料，采用渥堆工艺，经后发酵加工形成的散茶和紧压茶^[1]。

目前普洱茶市场良莠不齐，鱼龙混杂。时间不长的生茶和熟茶很好区别，从外观颜色上就能分辨：生茶颜色青绿，而熟茶暗红或栗红，栗黑色。时间较长的生茶和熟茶界定模糊，难以区别^[2]。缺少统一的科学化手段鉴定普洱茶的品质。

近年来随着化学计量学的发展，模式识别技术，包括主成分分析（PCA）、聚类分析（CA）和判别分析（LDA）等广泛被利用于对植物的产地和等级进行鉴别。Valera^[3]和Fernandez^[4]等利用模式识别技术区别绿茶和黑茶，Budinova^[5]等将近红外技术与模式识别相结合，鉴定茶叶种类。Pedro L^[6]等以茶叶中的儿茶素类及生物碱类成分为依据，运用PCA和LDA分析对茶叶进行品种和产地的鉴定。Antonio^[7]等用ICP-MS法，分析茶叶中的微量元素，运用PCA、CA、LDA和SIMCA对茶叶种类进行鉴别。

本研究采用模式识别技术，借助茶多酚类及咖啡因含量来对普洱茶进行鉴别，能很好的区分普洱生茶与熟茶。

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2010/7/20 10:05:17 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

1. 实验部分

1.1 仪器与试剂

仪器：Agilent 1200高效液相色谱系统、Thermo Finnigan TSQ Quantum Ultra 液质联用系统、梅特勒托利多十万分之一电子天平。

试剂：乙腈（色谱级）购于默克公司，磷酸（色谱级）购于天津光富精细化工研究所，超纯水（自制）。

对照品：EC(批号878-701102)、C(批号877-200001)、CAF（批号171215 -200608）购于中国药品生物制品检定所，GA、GC、EGC、C、CAF、EC、EGCG和ECG以上茶多酚类成分购自于Sigma公司，纯度均≧98%。

茶样：普洱熟茶（标记为SHU）20份，普洱生茶（标记为SHENG）20份。

1.2 色谱条件

phenomenex synergi 色谱柱（250mm×4.6mm，4µm）；流动相A：0.5%甲酸溶液，流动相B：乙腈。梯度洗脱程序：0min(2%B） 50min (25%B)；流速：1mL/min；柱温：30℃；检测波长210nm；进样量10µL。

1.3 质谱条件

电喷雾负离子模式，毛细管电压4 kV，毛细管温度350℃，辅助气压力3.5×10⁵，雾化氮气压力1.5×10⁵。扫描质量范围：m/z 150～750。

1.4 供试品溶液制备

准确称取1.000 g茶叶样品于500 mL锥形瓶中，加入200 mL超纯水，称重，在60℃的水浴中提取30 min，称重，加超纯水补足重量，混匀，过0.45µm滤膜，作为供试品溶液。

1.5 对照品溶液的制备

精密称取CAF、EGCG、ECG各约25 mg，G、GC、C各约2.5 mg，EGC约6 mg，EC约10 mg，置于50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

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