主题：【在线讲座33期】液相色谱柱使用疑难问题解析(答疑结束）

原文由 wkfei1128(wkfei1128) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教：
色谱柱的安装有什么技巧吗？只要保证不漏就行了吗？
还有所谓的死体积怎么测定呢？

测定多肽样品时，十几肽或者二十几肽时，有时峰前延的比较厉害，有时峰拖尾比较厉害，这是什么原因呢？是样品的问题还是柱子的问题？

原文由 老多_小多(emoc98311) 发表:

原文由 wkfei1128(wkfei1128) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教：
C18柱如果之前曾有些天一直保存在酸性环境中，会对柱子有什么损坏吗？ph在2左右。

2接近极限了，肯定是相当的不好

原文由 wkfei1128(wkfei1128) 发表:

原文由 plexu(plexu) 发表:

原文由 wkfei1128(wkfei1128) 发表:
感谢月旭在本版面做论坛线上讲座！
您好！我有以下问题想请教：
1、对于一根常用的C18住，拿到一根新柱的时候应该怎样进行活化及维护？为什么要这样做？希望能够详细些，非常感激。
2、测定多肽，一般采用什么柱子？流动相是乙腈和水，还有微量的TFA。特别是像类似三肽的短肽，应该怎么选择柱子？

新柱活化，实际上是一个平衡的过程，除了用流动相平衡外，有时候还必须用所测样品对新柱进行平衡，特别是测定分子量比较高的多肽，尤其重要。因为分子量高的物质分子，扩散速度慢，平衡所需时间也相应较长。具体平衡方式也很简单，多进几次样品，直到峰面积和保留时间稳定，再进行正式进样测定。
如果要加快平衡时间，把前面用来平衡的进样样品浓度加大，或者不等洗脱完成，连续进样多针。用待测物对新柱平衡，目的是将硅胶基质填料表面具有非特异性吸附的位点的吸附能力饱和掉。

分子量不高的多肽一般选用常规C18柱就能测定，也有用离子交换柱、水性C18柱和Hilic亲水作用柱的。

非常感谢plexu的回答，还有一点不明白，就是记得以前拿到C18柱，会用甲醇从小流量到大流量慢慢活化，这样做的目的是什么呢？是先用溶剂活化吗？然后再用样品？
还有测定短肽总是冲出来，该怎么解决呢？就是和溶剂峰出在一起，或者出在溶剂峰之前。

原文由 dongyuzhang520(dongyuzhang520) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教，

我们在用的氨基柱时，有时候峰型突然变宽，有拖尾，用一段时间就又好了，不明白是什么原因造成的，如果要再生氨基柱的时候应该怎么做呢？是像您先前回答的问题中提到的，用一定比例的氨水冲洗吗？

氨基柱可以直接用纯水冲洗吗？记得当时买的氨基柱那个使用说明书上说不能用纯水冲？是这样的吗？如果可以冲的话，一般冲多久？

谢谢！

原文由 wkfei1128(wkfei1128) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教：
C18柱如果之前曾有些天一直保存在酸性环境中，会对柱子有什么损坏吗？ph在2左右。

原文由 plexu(plexu) 发表:

原文由 wkfei1128(wkfei1128) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教：
C18柱如果之前曾有些天一直保存在酸性环境中，会对柱子有什么损坏吗？ph在2左右。

pH2左右容易使键合在硅胶基质上的固定相水解流失，包括C18和封尾试剂的水解，封尾试剂相对更容易水解。不知道你保存的酸性环境是不是含有缓冲盐，如果不含缓冲盐，只是短期几天保存在酸性流动相中，也不必过份担心，最多相当于这几天一直在使用这根色谱柱，因此减少几天的使用寿命吧；有缓冲盐就麻烦一点，保存期间水分挥发可能会导致缓冲盐结晶在柱内析出，对柱子损伤很大。

原文由 xue2009(xue2009) 发表:

原文由 老多_小多(emoc98311) 发表:

原文由 wkfei1128(wkfei1128) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教：
C18柱如果之前曾有些天一直保存在酸性环境中，会对柱子有什么损坏吗？ph在2左右。

2接近极限了，肯定是相当的不好

恩，我估计PH为2的时候硅胶已开始大量脱落了