主题：【在线讲座33期】液相色谱柱使用疑难问题解析(答疑结束）

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你好。想问一下峰形后拖尾是什么原因造成的

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plexu您好！我有以下问题想请教：
我在用乙腈作流动相时，只要那个乙腈比例稍高一点，比如20%，即使测量波长高于乙腈截止波长比较多，也会产生比较大的溶剂峰，这怎么回事？

我估计不是有机相的问题，而是水相的问题，你水相用的什么缓冲盐？

没用缓冲盐也一样的，我上次用乙腈：水（35：65）作流动相也一样的，检测波长288

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plexu您好！我有以下问题想请教：
C18柱如果之前曾有些天一直保存在酸性环境中，会对柱子有什么损坏吗？ph在2左右。

pH2左右容易使键合在硅胶基质上的固定相水解流失，包括C18和封尾试剂的水解，封尾试剂相对更容易水解。不知道你保存的酸性环境是不是含有缓冲盐，如果不含缓冲盐，只是短期几天保存在酸性流动相中，也不必过份担心，最多相当于这几天一直在使用这根色谱柱，因此减少几天的使用寿命吧；有缓冲盐就麻烦一点，保存期间水分挥发可能会导致缓冲盐结晶在柱内析出，对柱子损伤很大。

没有缓冲盐的，那就好，但是对于峰形的问题还是很发愁，昨天还出了一个问题，同一个样品，在一台仪器上出来时分叉的峰，在另一台是一个峰，并且纯度还蛮高的，出封时间在8-10min，不知道咋办了，所用的条件应该是一样的

那就是两仪器柱子的问题咯，你用同一根柱子在两台仪器上做下看看

这倒是没试
因为仪器不是我们实验室滴
那柱子出了什么问题，会造成这样的结果呢？
是柱子的键合相流失的原因么？

一般是柱子脏了，或者固定相坍塌了，把柱子反冲下就好了，这个很容易搞定的

可是，那为什么走别的样就好好的呢？
还有没有是别的原因造成的呢？
反冲，一般选用什么试剂，有什么需要注意的吗？以前没有反冲过

那我估计就是你样品的问题，你样品是拿流动相溶的不？注意溶剂强度不能大于流动相强度。还有，你样品PH值调了没？你调样品PH值做下看。

样品一般是用水溶的，流动相是乙腈和水，有的样品好好的，有的样品分叉，样品从来没有测过PH，实验室没有ph计。
今天测柱效，发现峰性不对称，是不是柱子塌陷了呢?如何评价柱效？

柱头被污染，会出现裂峰还有拖尾。如果柱头塌陷了，测所有样品都会有裂峰，你这种部分样品产生裂峰的现象，估计是柱头污染的可能比较大。

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plexu您好！我有以下问题想请教，
请问：我们有一台waters1525色谱仪，最近基线总是呈现波浪形很有规律，波长越小越明显，梯度洗脱时向上飘逸而且后一段时间呈现波浪形，很影响分析，我想问一下，是不是柱子的原因，用的是C18上海安普的？麻烦了1

你看压力稳定不？我估计很有可能是柱子的问题，柱子里面有强保留性物质，建议先把柱子清洗干净，用甲醇或者异丙醇冲洗，不接检测器。

您好！我换了一根新柱子可还是出现上述情况，请问还有哪些原因能够造成上述情况，能给解析一下么？谢谢，各位操作液相色谱的没出现过上述情况么？

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原文由 wkfei1128(wkfei1128) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教：
C18柱如果之前曾有些天一直保存在酸性环境中，会对柱子有什么损坏吗？ph在2左右。

pH2左右容易使键合在硅胶基质上的固定相水解流失，包括C18和封尾试剂的水解，封尾试剂相对更容易水解。不知道你保存的酸性环境是不是含有缓冲盐，如果不含缓冲盐，只是短期几天保存在酸性流动相中，也不必过份担心，最多相当于这几天一直在使用这根色谱柱，因此减少几天的使用寿命吧；有缓冲盐就麻烦一点，保存期间水分挥发可能会导致缓冲盐结晶在柱内析出，对柱子损伤很大。

没有缓冲盐的，那就好，但是对于峰形的问题还是很发愁，昨天还出了一个问题，同一个样品，在一台仪器上出来时分叉的峰，在另一台是一个峰，并且纯度还蛮高的，出封时间在8-10min，不知道咋办了，所用的条件应该是一样的

两台仪器用的是一根柱子不？如果不是一根柱子就说明是柱子的问题

根据wkfei1128所说的这个现象，我认为有可能是仪器的问题，也有可能是柱子的问题；要查明到底是仪器还是柱子上的因素引起的其实很简单，只要把需要做样的这根色谱柱分别接到两台不同的仪器上分析这个样品即可，需要注意的是，查原因的时候不能接保护柱，特别是填料与色谱柱不匹配的保护柱，因为保护柱上的污染物有时会引起峰形分叉，用填料与色谱柱不匹配的保护柱也有可能造成这种分叉峰。所以，我们需要更确切一些的证据才能确认到底是什么原因引起的，在这之前什么结论都不应该下，因为在查明之前所有的因素都应该算作可能的原因。

如果是仪器的问题，能有些什么问题？我倒认为是竹子的问题

我不认为直接下结论是一个好的方式，仪器上管路有污染也有导致峰形分叉的可能，还有单泵运行和双泵运行在流速会有差异，很多售后服务的案例表明，仪器上的差异会导致峰形的变化，毕竟nothing is impossible，查原因需要谨慎一点好

原文由 wkfei1128(wkfei1128) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教：
1、请问怎么测柱效？怎么评价柱效？理论塔板数怎么计算？柱子填料是SinoChrom ODS-BP 5um ，规格4.6mm*200mm
2、我用苯试了一下，峰性大大好，但是不知道理论塔板数，不知道怎么评价，感觉不大好，对称性不好，有点前延，柱子才用了四个月，是什么原因呢？是不是塌陷了呢？有什么补救的办法吗？
3、流动相里之前有酸的，做完后单纯用乙腈冲洗，能把酸冲洗干净吗？之前他们是这样冲的，现在怀疑柱子塌陷了，会不会是长时间在酸性环境中造成的呢？

之前提问过的，没有看到回答结果，请大家见谅。

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原文由 zxm-1980(zxm-1980) 发表:
plexu您好！我有以下问题想请教，
请问：我们有一台waters1525色谱仪，最近基线总是呈现波浪形很有规律，波长越小越明显，梯度洗脱时向上飘逸而且后一段时间呈现波浪形，很影响分析，我想问一下，是不是柱子的原因，用的是C18上海安普的？麻烦了1

你看压力稳定不？我估计很有可能是柱子的问题，柱子里面有强保留性物质，建议先把柱子清洗干净，用甲醇或者异丙醇冲洗，不接检测器。

您好！我换了一根新柱子可还是出现上述情况，请问还有哪些原因能够造成上述情况，能给解析一下么？谢谢，各位操作液相色谱的没出现过上述情况么？

你好，我用的也是waters1525色谱仪，
你用的什么流动相呀
我以前也是基线慢慢往下漂
调了流动相，好些了