主题：【第三届原创参赛】奶粉中雌酮、雌二醇、醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮 SPE-LC/MS/MS检测方法

浏览0 回复18 电梯直达

博纳艾杰尔

结帖率：

100%

关注：0 |粉丝：0

新手级：新兵

发表于：2010/08/14 14:55:24 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

该帖子已被土老冒豆豆设置为精华；

维权声明：本文为sh100800原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现的，均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。也请哪些垃圾网站不要随便转载，谢谢合作！

1．实验部分：

1.1材料、试剂

Cleanert PEP吡咯烷酮化聚苯乙烯/二乙烯基苯固相萃取柱(100mg/6mL, P/N: PE1006，博纳艾杰尔科技)；Cleanert Silica CM改性硅胶固相萃取柱 ( 1000mg/6mL , P/N : CM0006，博纳艾杰尔科技)

液相色谱柱 (Halo C18 , 2.1×100mm, 2.7μm, P/N: 92812-602，博纳艾杰尔科技）

标准品：雌酮（CAS.No. 53-16-7）、雌二醇（CAS.No. 50-28-2）、醋酸甲地孕酮（CAS.No. 595-33-5）、醋酸氯地孕酮 (CAS.No. 302-22-7 )，购自中国药品生物制品检定所。

1.2样品前处理方法

1.2.1 Cleanert PEP样品提取净化法

提取：取2g奶粉，加标，然后加12mL 80% 乙腈，涡旋混匀两分钟后，离心（90000r/min， 6min）取3mL上清液，加入9mL超纯水稀释，涡旋混匀后，待过Cleanert PEP柱净化。

净化步骤：

1) 活化：以5mL乙腈，5mL水活化Cleanrt PEP；

2) 上样：把上述稀释后的样品溶液过柱，流速控制以1mL/min为宜；

3) 淋洗：待样品溶液完全通过小柱后，用5mL 5%乙腈淋洗小柱，然后真空抽干3min；

4) 洗脱：以3-5mL乙腈洗脱目标，收集流出液；

5) 浓缩：收集液以氮气浓度吹干（40℃水浴），后以50% 甲醇水定容至1mL，混匀后过0.22μm微孔滤膜过，进LC-MS/MS分析。

1.2.2 Cleanert Silica样品提取净化法

提取：取2g奶粉，加标，然后加12mL 乙腈，涡旋混匀两分钟后，离心（9000r/min， 6min）取3mL上清液，待过Cleanert Silica柱净化。

净化步骤：

1) 活化：以5mL乙腈活化Cleanrt Silica小柱；

2) 上样：把上述提取液过柱，收集流出液；

3) 淋洗：以5mL乙腈洗涤小柱，收集流出液；

4) 浓缩：合并以上流出液液，以氮气浓度吹干（40℃水浴），后以50% 甲醇水定容至1mL混匀后过0.22μm微孔滤膜，进LC-MS/MS分析。

1.3 LC-MS/MS检测条件

1.3.1 孕激素（醋酸甲地孕酮、醋酸氯地孕酮）测定

液相色谱条件：色谱柱 (Halo C18， 2.1×100mm, 2.7μm)；流动相：A：0.1%甲酸水，B: 甲醇，梯度条件（略）；流速：0.3mL/min，柱温：40℃,进样量：10μL

参考质谱条件：电离源：电喷雾正离子模式；其他（略）

1.3.2 雌激素（雌二醇、雌酮）测定

液相色谱条件：色谱柱（Halo C18 2.1×100mm,2.7μm）；流动相：A：水，B: 乙腈，梯度条件（略）；流速：0.3mL/min，柱温：40℃, 进样量：10μL

参考质谱条件：电离源：电喷雾负离子模式；其他（略）

2．结果与讨论：

结果见图1、图2。用Cleanert PEP (反相)或Cleanert Silica CM(正相) 两种净化手段均可到达满意的回收率和净化效果，添加浓度在25ppb时回收率可达到80% 。

用Halo色谱柱可以实现样品的快速分离，大大提高工作效率。

雌二醇和雌酮两种激素，质谱相应偏低，质谱条件需要进一步优化。

本实验结果采用单点定量判定，结果可能有失偏颇，详细数据需做基质添加标准曲线确证，方法的精密度，稳定性等亦需要进一步确证。