二、用户如何选择适合自己的方法和仪器氨基酸分析的方法和仪器多种多样,用户应该根据自己的实际应用情况和发展趋势来选择方法和仪器。选择时可参考以下几个方面:
1、是否需要对分析结果负责(如对外出具报告等)
IEC仪器使用茚三酮柱后衍生法,符合国家标准和国际仲裁标准,而IC法和HPLC法虽然总体性能也比较稳定可靠,但其测量结果与茚三酮法有较大差异,且结果难以长期重复,这对于仲裁不利。目前,IC法和HPLC法分析氨基酸一般仅用于不太深入的研究,而且主要是利用其灵敏度较高的特性。也有部分企业用来做内部质量控制(国家没有制定相关标准),但如果要考虑对外做样并出具结果报告,IEC仪器是唯一选择。由于国内的氨基酸分析呈现急剧上升的势头,而很多单位经济能力有限,因此也确有不少单位购买专用氨基酸分析仪作为创收手段。
2、一次进样需要出峰的数量是多还是少
氨基酸种类繁多、性质接近,因此氨基酸分析是色谱界公认的难题,尽管现在有多种多样的方法,但没有任何方法能够保证所有氨基酸峰能够一次进样完全的分离。仅仅从分离程度来说,好的HPLC方法最多可以一次分离检测20种左右的氨基酸峰,IC法最多可一次分离检测约30种氨基酸峰(理论上说来,IC法可达到与IEC法相当的出峰数量,但金电极的基线漂移较大,保留时间太长的峰就难以定量分析),IEC法最多一次可分离检测50种左右的氨基酸峰。从这个角度来说,如果您需要分析游离氨基酸样品,就应当选择IEC仪器。
3、氨基酸分析频率高还是低
氨基酸样品分析频率如果达到每个星期至少1次,就可以算“频率较高”,少于每周1次就可以说是“较低”。频率较高时,应当仪器专用化(即便是用HPLC和IC法,也应专用于氨基酸分析),因为反复更换柱子和缓冲体系不仅麻烦、平衡时间长,难以保证分析结果的可靠性和重复性,而且容易损坏仪器。
4、氨基酸样品总量是多还是少
总体的成本应考虑到做样成本,而不能只看仪器本身。HPLC做氨基酸分析时,每根柱子只能进样100~500针,而IEC仪器的柱子都超过1000针(sykam柱子使用国产试剂时大于4000针,使用进口试剂时大于6000针)。
如果都使用国产试剂,HPLC仪器单针成本平均160元人民币,IEC仪器单针成本平均不到20元人民币,IC仪器单针成本平均60元人民币(IC法无需衍生剂,但检测电极是消耗品)。此处计算了标样、缓冲溶液、衍生剂、柱子等消耗品价格,而仪器的维护保养费用相同(未计算)。下表是专用氨基酸分析仪IEC、HPLC和IC(都配置自动进样,HPLC加配氨基酸分析包)的总成本分析。
也就是说,当分析样品量超过1000个(进样针数大于2500),IEC专用氨基酸分析仪就开始成为费用最低的仪器了。通常仪器的使用寿命超过8年(平均10年左右),只要每年的样品量大于100个,IEC仪器就没有价格上的劣势。