主题：【求助】食品中总皂甙的测定应该用哪个标准呀？

1 范围
本方法规定了以褪黑素为有效成分的胶囊或片剂包装的保健食品中褪黑素的测定方法。
本方法适用于以褪黑素为有效成分的胶囊或片剂包装的保健食品中褪黑素的测定。
    本方法高效液相色谱-紫外检测法的检出限为0.5ng；取样量0.5g时，检出浓度为0.07mg/kg。本方法高效液相色谱-荧光法的检出限为30pg，线性范围为0.05～0.50ng。
第一篇  高效液相色谱-紫外检测法
2 原理
试样中的褪黑素经溶解、稀释、过滤后,使用具有紫外检测器的高效液相色谱仪检测,根据色谱峰的保留时间定性,外标法定量。

3试剂
除非另有说明，在分析中仅使用确定为分析纯的试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。
3.1甲醇:色谱纯。
3.2无水乙醇：优级纯。
3.3三氟乙酸：优级纯。
3.4高效液相色谱流动相：甲醇：水：三氟乙酸=45：55：0.05。
3.5褪黑素（Melatonin）标准品：Sigma公司产品。
3.6褪黑素标准溶液的配制
  精确称量30mg褪黑素标准品于100mL容量瓶中，加入70%乙醇溶解后定容至刻度。准确吸取2mL上述溶液于10mL容量瓶中，加入流动相（3.4）定容至刻度，此溶液浓度为0.060mg/mL。

4仪器设备
4.1高效液相色谱仪：附紫外检测器。
4.2超声波清洗器。
2.3离心机。

3. 分析步骤
5.1试样处理：使用研钵将片剂或胶囊研成粉末并使之混合均匀。
5.2精确称量约一粒片剂或胶囊的重量于10mL容量瓶中，以70%乙醇定容至刻度，使用超声波清洗器提取10min。将提取液离心至澄清。准确量取上清液2mL于10mL容量瓶中，以流动相定容至刻度，混匀后经0.45μm滤膜过滤后进行色谱分析。
5.3测定
5.3.1液相色谱参考条件
5.3.1.1色谱柱： C18，4.6mm×250mm。
5.3.1.2紫外检测器：检测波长：222nm。
5.3.1.3流速：0.8mL/min。
5.3.1.4柱温：室温
3.3.2色谱分析
量取10μL标准溶液及试样净化液注入高效液相色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比较定量。
5.3.3 色谱图

第二篇      高效液相色谱荧光法

1 原理

试样中褪黑素经甲醇反复提取，制成甲醇溶液，按一定比例进行稀释后，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，以荧光检测器进行检测，根据保留时间定性和与标准品峰面积比较进行定量。

9 试剂

9．1 甲醇：重蒸。

9．2 褪黑素标准品：纯度为99.7％。

9．2．1 储备溶液：精密称取褪黑素标准品0.0100g，用甲醇溶解并配成1g/L的储备

溶液，于-20℃保存。

9．2．2 使用溶液：使用前精密量取一定量标准品储备溶液，根据褪黑素在仪器上的响应情况，用甲醇稀释成标准使用溶液。

10 仪器

10．1高效液相色谱仪：附荧光检测器和微处理机。

10．2离心机

10．3超声波清洗机

11 试样制备

  片剂研细备用；胶囊内容物混合均匀备用。

12 分析步骤

12．1提取

  精密称取试样0.2000g于5mL的刻度试管中，加甲醇约3mL，超声振荡10min，离

心，取上清液于10mL容量瓶中，再加甲醇约3mL于残渣中，按前述方法重复提取2次，合并上清液，加甲醇至刻度，摇匀。取此溶液适量，用甲醇稀释并定容，制成试样溶液待测。

12．2测定

12．2．1高效液相色谱条件

12．2．1．1色谱柱：C_l8 4.6mm×250mm不锈钢柱。

12．2．1．2流动相：甲醇。

12．2．1．3流速：1mL／min。

12．2．1．4进样量：10mL

12．2．1．5检测器：荧光检测器，激发光波长286nm，发射光波长352nm。

12．2．2色谱分析

　　将仪器调至最佳状态后，分别将10mL标准溶液及净化后试样液注入色谱仪中，以保留时间定性，以试样峰高或峰面积与标准比较定量．本方法线范性围为0.05-0.50ng。

13 分析结果的表述

13.1 计算