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主题：【求助】GPC软件问题

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huliying11

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发表于：2010/12/07 15:43:07 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

有没有人用欧洲方法做过GPC，紫外和示差数值都要用到的？一般都用一个的呀

该帖子作者被版主 yuzengsheng加 3积分， 2经验，加分理由：鼓励提问

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2010/12/12 10:43:24 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

你最好把欧洲的标准发出来，很多不知道你说的是什么方法。
紫外和示差都是浓度检测器，一般只会用一个检测器，紫外可以测定特定波长的吸收，但有些高分子没显色基团，紫外就没吸收，无法显示检测其物质，这时就需要用示差。
针对你的问题，就是和你测定的目标物质的性质有关，是否和紫外吸收基团有关，所以需要用两个检测器来判断。

该帖子作者被版主 emoc98311加 4积分， 2经验，加分理由：应助

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2010/12/13 13:39:11 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

以亲水性键合硅胶为填充剂［如TSK G2000SWXL(300mm×7.8mm)或相应的可分离15000～100000分子量蛋白质的色谱柱］；以2.84%无水硫酸钠溶液（用稀硫酸调节pH值至5.0）为流动相；流速为每分钟0.5ml；柱温为35℃；紫外检测器和示差折光检测器以先后次序串联连接色谱柱的出口，准确测量两个检测器的延滞时间以使两色谱图对应，检测波长为234nm。取对照品溶液25μl，注入液相色谱仪，记录紫外和示差色谱图，校正保留时间应为示差检测器的时间。由紫外色谱图的总峰面积（∑UV234）和示差色谱图的总峰面积（∑RI）（除去主峰后的盐和溶剂峰）按式⑴计算比值r；再按式⑵计算f值。由校正因子f按式⑶计算示差色谱图上每个时间点的分子量Mi：
r=∑RI/∑UV234 ⑴
　 f=Mna/r ⑵
Mi=f×RIi/UV234i ⑶
式中Mna为对照品的数均分子量；
　　RIi和UV234i 分别为示差和紫外色谱图中各相应时间的峰高。
　　　　以保留时间对分子量用GPC软件做系统校正。

r计算时不是示差和紫外都要用到吗

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