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主题：【转帖】层析柱相关应用

浏览0 回复12 电梯直达
learner1999
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发表于：2010/12/10 09:15:08 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
层析柱
  极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统
  极性较大的用甲醇：氯仿系统
  极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统
  拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸
硅胶柱层析
下面介绍我现在惯用的方法：匀浆法。
  1。称量称30-70倍于上样量；如果极难分，也可以用100倍量的硅胶H。干硅胶的视密度在0.4左右，所以要称40g硅胶，用烧杯量100ml也可以。
  2。搅成匀浆。加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。
  3。装柱。将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。
该帖子作者被版主 幽灵龙猫加 5积分， 2经验，加分理由：感谢分享 辛苦了~
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learner1999
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2010/12/10 9:15:15 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
4。压实。沉降完成后，加入更多的石油醚，用双联球或气泵加压，直至流速恒定。柱床约被压缩至9/10体积。无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。
  5。上样。干法湿法都可以。海沙是没必要的。上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。
  6。过柱和收集。柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。太低的洗脱强度并不好，推荐用梯度洗脱。收集的例子：10mg上样量，1g硅胶H，0.5ml收一馏分；1-2g上样量，50g硅胶（200-300目），20-50ml收一馏分。
  7。检测。要更多地使用专用喷显剂，如果仅用紫外灯，会损失较多产品，紫外的灵敏度一般比喷显剂底1-2个数量级。
  8。送谱。收集的产品旋干，在送谱前通常需要重结晶。如果样品太少或为液体，可过一小凝胶柱，作为送谱前的最后纯化手段。可除去氢谱1.5ppm左右所谓的“硅胶”峰。
  1.先根据TLC方法筛选好洗脱剂，使两相邻物质Rf值之差最大化
  2.将柱子必须装平整、均匀
  3.考虑有限柱填料的吸附量
  4.可考虑用剃度法分开并洗脱
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learner1999
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2010/12/10 9:17:08 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
关于柱子的尺寸，应该是粗长的最好
  柱子长了，相应的塔板数就高。柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。试想如果柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。而如果样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说，不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。
  现在见到的柱子径高比一般在1：5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，具体的选择要具体分析。如果所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf在0.2～0.4，杂质相差0.1以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如200毫克的样品，用2cm×20cm的柱子）；如果相差不到0.1，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用3cm的，也可以减小淋洗剂的极性等等。
  真空液相层析即vacuum liquid chromatography(VLC),即用真空代替压力进行层析，具体方法可见Synthesis,2001,No,16,2431-,and J chem edu,1997,10,1222-干法上样，一般用于固体或粘度大的液体样品。样品用低沸点易溶溶剂溶解，加入1-3倍的粗硅胶，晾干或旋干，干燥的标准是硅胶成细粉而不粘在瓶壁上。装好的柱子上留一段溶剂，把吸附了样品的硅胶慢慢到进去，震动柱子或再加一些溶剂，把粘在柱壁上的硅胶洗下
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阿三
junqiwudi
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2010/12/11 11:11:54 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
关于楼主的 关于柱子的尺寸，应该是粗长的最好 个人觉得得具体情况具体分析 呵呵
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2010/12/11 11:12:15 Last edit by junqiwudi
头像更新中，请稍候…
kaikaifeng
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2010/12/16 23:51:03 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统

事实上，柱层析的时候，用多种系统是很痛苦的
这涉及到回收的问题
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阿三
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2010/12/17 0:15:22 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 环烯醚萜(kaikaifeng) 发表:
极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统

事实上，柱层析的时候，用多种系统是很痛苦的
这涉及到回收的问题
而且梯度多了也很麻烦 等度跑还行
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2010/12/18 14:04:14 Last edit by junqiwudi
头像更新中，请稍候…
kaikaifeng
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2010/12/17 23:48:00 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 阿三(junqiwudi) 发表:
原文由 环烯醚萜(kaikaifeng) 发表:
极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统

事实上，柱层析的时候，用多种系统是很痛苦的
这涉及到回收的问题
而且梯度多了也很麻烦 等都泡还行

主要是他们的比例问题不好确定，比较麻烦
一般都不能回收利用的，很浪费
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yuduoling
yuduoling
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2010/12/21 19:56:27 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这个方法确实不错的
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foumy
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2010/12/21 23:16:32 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
对于用极性溶解溶解的可以考虑硅胶吸附后旋干干法上柱。
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头像更新中，请稍候…
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2010/12/22 11:08:14 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 艺泰安邦(foumy) 发表:
对于用极性溶解溶解的可以考虑硅胶吸附后旋干干法上柱。

你说的其实就是拌样吧
但是，这种旋干法，可能吸附不会很好
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阿三
junqiwudi
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2010/12/22 13:49:56 11楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 艺泰安邦(foumy) 发表:
对于用极性溶解溶解的可以考虑硅胶吸附后旋干干法上柱。
倒是可以尝试下
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