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主题：【求助】做梯度遇到的问题

浏览0 回复39 电梯直达
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青林
wyqql2060
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2011/1/28 15:32:45 32楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
梯度变化太快的确会出现这种情况的！
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linliu5795
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2011/1/29 11:30:04 33楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是不是乙腈不纯  进空白试试
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luyu186
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2011/2/9 14:49:45 34楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这个梯度问题很经典，相信在国内实验室条件下会很经常地出现。解决办法按标准方法来说，应当是 使用合格的hplc级纯水和合格的乙腈，并经过严格脱气后，可以得到在214nm下杂质强度不超过5mau的梯度曲线，要求再高就无能为力了。
从你的图来看，应首先确认溶剂质量，然后做系统清洗
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xcf220105
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2011/2/11 10:39:26 35楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 luyu186(luyu186) 发表:
这个梯度问题很经典，相信在国内实验室条件下会很经常地出现。解决办法按标准方法来说，应当是 使用合格的hplc级纯水和合格的乙腈，并经过严格脱气后，可以得到在214nm下杂质强度不超过5mau的梯度曲线，要求再高就无能为力了。
从你的图来看，应首先确认溶剂质量，然后做系统清洗


你的建议确实不错，梯度变化太大。溶剂质量要求要高
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无声潜伏
wang_ruyi
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2011/2/11 15:06:25 37楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 caoyin9512(caoyin9512) 发表:
是第一次做这个,会与乙腈与水的比例有关吗?没有在线脱气的话会出现这样的问题吗?


LZ用的是二元泵还是四元泵？
如果是四元泵，做梯度必须用脱气机，而且60min的时候比例变化那么大，产生气泡是不可避免的
估计是气泡峰
如果用二元高压泵没有在线脱气的话影响不是特别大，但是不排除也会产生气泡的可能

另外这个比例变化得也太快了，基线变化肯定是非常大的
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sea1981
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2011/2/11 21:58:23 38楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我做的时候也经常遇到这事，你可以试着用异丙醇冲冲，不过很难洗干净。再有就是流动相，一定要用纯度较高的。把仪器通道中有过滤的滤头能换的换掉，针座也洗洗，还有检测池，然后再做做看！
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〓猪哥哥〓
03yx2
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2011/2/12 10:49:06 39楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 caoyin9512(caoyin9512) 发表:
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
时间    A            B
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把B相换成90%的乙腈试试。楼主的检测波长是多少？

先谢谢你的建议,我会先试一下,但不知这是什么原因,想请问这会不会与乙腈和水的比例有关,因为在鼓包的位置乙腈和水的比例大约是在65:35,这个是最容易产生气泡的比例,加上仪器没有在线脱气,所以出现这种情况.


这个大包确实有可能是气泡引起的。走过空白也有这个大包？
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fly-away
fly-away
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2011/2/12 11:07:03 40楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
没有没有脱气必然是2元高压，要不什么都做不了！感觉如果是外标法的话对结果影响不大吧，如果只是为了美观，那还是放慢梯度的比例试下（运行时间会长些）。如果感觉是因为气泡的原因，建议到有在线脱气的仪器上试下！
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looye2006
looye2006
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2011/2/12 16:00:43 41楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
在40min时，有机相与水相比例是比较接近的时候，产生气泡。
解决办法，把室温和柱温调到差不多。如室温20C，那柱温设20C。看一下。
超声。
或扣空白。
设参考波长。
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