主题：【分享】琼脂糖凝胶电泳技术

电泳基本原理
迁移率（或泳动度）是指带电颗粒在单位电场强度下泳动的速度，可用下列公式计算：
Ｕ =υ/E =(d/t)/(V/l) =dl/Vt
Ｕ为迁移率（cm2•V-1•min-1）；υ为颗粒泳动速度（cm•s-1）；E 为电场强度（ V•cm-1）；d为颗粒泳动的距离（cm）；l为滤纸有效长度（cm）；V为实际电压（V）；t为通电时间（s或min）。通过测量d, l, V, t, 即可计算出被分离物质的迁移率。
1迁移率单位= 10-5 cm2•V-1•min-1在确定的条件下，某物质的迁移率为常数，是该物质的化学特征常数。 颗粒带净电荷多，直径小而接近于球形，则在电场中泳动速度快，反之则泳动速度慢。
迁移率还与分子的形状，介质粘度，颗粒所带电荷有关，迁移率与颗表面电荷成正比，与介质粘度及颗粒半径成反比。
影响琼脂糖电泳迁移的主要因素
电场强度 溶液的pH值 溶液的离子强度 电渗现象 温度的影响 支持物的影响
按分离原理分类：
1.区带电泳 2.移界电泳 3.等速电泳 4.聚焦电泳
按有无固体支持物分类
1. 纸上电泳 2. 醋酸纤维素膜电泳 3. 薄层电泳
4. 非凝胶性支持物区带电泳（支持物有：淀粉、纤维素粉、玻璃粉、硅胶）
5. 凝胶支持区带电泳（淀粉凝胶、聚丙稀酰胺凝胶、琼脂糖凝胶）
影响琼脂糖电泳迁移的主要因素
DNA的大小    DNA的构象  琼脂糖浓度  缓冲液  不同构像质粒
缓冲液 TAE：乙酸盐缓冲液 TBE：硼酸盐缓冲液 TPE：磷酸盐缓冲液
实验操作
1. 用胶带将洗净、干燥的水平板的边缘封住，形成一个胶模并水平放置。
2. 按水平板的长×宽×0.5cm胶厚，量取0.5×TBE，并按0.7％的浓度称取agarose琼脂糖，在微波炉或电炉上加热至全熔（清澈透明）。
3. 等凝胶温度降至大约50－60以下时，加入1 mg/L溴化乙锭（EB）至终浓度为0.5ug/mL ；摇匀并轻快地倒入水平板中，除掉气泡，插入梳子。
4. 凝固后，将梳子轻轻拔出。
5.去掉胶带，将水平板放入加有0.5×TBE电泳缓冲液的电泳槽中，并且使电泳缓冲液高出凝胶约1mm。
6.在parafilm膜上依次加： ddH2O 6ul,上样Buffer 2ul ,DNA 4ul 分别混匀后点样，记录点样次序。
7. 在水平板两边的点样孔中分别加入6 μ l的λΔΝΑ/EcoRI+HindIII marker。
8. 盖好电泳槽盖子，选择适当的电泳电压（≤5V/cm）及电泳方向(DNA阴极阳极），开始电泳。
9. 当色素接近胶的先端，停止电泳，样品在紫外灯下观察、成像℃