最近在开展氨基糖苷类(包括卡那霉素\庆大霉素\链霉素\双氢链霉素\新霉素\安普霉素等)的检查,虽然有国标使用c18在做,但考虑到七氟丁酸容易污染到质谱,很是怕怕,所以就选择了hilic色谱柱。
第一次接触hilic色谱柱,遇到了以下问题:
现象:1. 使用等度洗脱,乙腈:水=90:10,所有项目的保留时间都在2.6min附近。
2. 使用梯度洗脱,流动相还是乙腈:水,每个项目出现了两个保留时间,一个还是在2.6min附近,另一个在9min附近,两个保留时间都是在乙腈比例最高的时候出现。
3.怀疑出现的峰是色谱柱被洗脱掉的物质,使用空白水进行测试(以上标准品使用水溶解),未出峰。排除是色谱柱及
液相系统的问题,说明这些峰应该是想要的标准品峰。
4.从论坛资料查询到的,有人说是用乙酸铵或甲酸铵可以,经测试,加入铵后,标准品不出峰或惨不忍睹。我使用的是10mM的浓度,不清楚是否是浓度太高的问题,但我觉得可能性不大。
疑问:1。所有的标准品保留时间一样,非常奇怪,很是怀疑这到底是不是我要的标准品峰。
2。跑标准曲线,不成线性,甚至部分项目低浓度的感度高于高浓度的,郁闷。。。
3。保留时间无法再向后拖了,因为乙腈的比例够高了,应该再怎样改变保留时间呢?
自己也搜索了一些资料,可是还没有一个比较完善的关于HILIC色谱柱的使用方法的资料,论坛中有人说使用HILIC是可以分析这些物质的,但给出的资料或说明又难以让人信服。
所以,希望对HILIC了解或正在使用HILIC的大侠多多给点意见,如果有人确实在做这几种物质的话(使用HILIC),小生那更是感激不尽了。。。。
欢迎大家在此热烈讨论。。。
更新:在论坛上搜到了个HILIC方法开展指南,给大家分享下。
欢迎继续探讨,希望这个帖子能够成为hilic开展方法的探讨贴。。。
更新:
看了些资料,hilic色谱柱使用需要以下
注意事项:
1。流动相至少需要5%的极性溶剂(如水,甲醇等)
2。流动相需要不低于40%的有机相(如乙腈)
3。使用甲酸铵或乙酸铵能得到较好的重现性。
4。定溶液不能使用100%的水
5。平衡时间比较长,一般需要10倍以上的柱体积平衡
更新:
经过一段时间的测试,通过使用hilic色谱柱目前还没有得到良好的效果。
使用资生堂的一款链霉素专用色谱柱,保留特性不错,只是感度还有点差,需要再进行优化。
由于最近忙于粘杆菌素的开展,氨基糖苷类的测试需要拖一拖了,如果,谁也在做粘杆菌素,不妨也来讨论下。