污染的清除和预防
一、污染的清除
培养细胞一经污染,多数较难处理。如果污染细胞价值不大,宜弃之;有细胞株留存的或可购置的,可在寻找原[img=absMiddle] align=[/img]后彻底消毒操作室,复苏或重新购置细胞,再培养。若污染细胞价值较大,又难[img=absMiddle] align=[/img]重新得到,可采取以下办法清除。
1、使用抗生素
抗生素对杀灭细菌较有效。联合用药比单独用药效果好。预防用药比污染后再用药效果好。预防用药一般用双抗生素(青霉素100u/mL加链霉素100μg/mL),污染后清除用药需采用大[img=absMiddle] align=[/img]常用量5~10倍的冲洗法,[img=absMiddle] align=[/img]加药后作用24~48小时,再换常规培养液。此法在污染早期可能有效。所用抗生素品种除青霉素、链霉素外,还可用庆大霉素、卡那霉素、多粘菌素、四环素、[img=absMiddle] align=[/img]霉菌素等。常用400~800μg/mL卡那霉素或200μg/mL四环素处理,每隔2~3日换液1次,传1~2代进行治疗。近年来有报道,4-氟,2-羟基喹啉(Ciprofloxacin,Cip)、截耳素衍生物(Pleu-romutilin derivative,BM-Cyclin2:BM-1和四环素衍生物(BM-2)等三种抗生素单用或合用对杀灭支原[img=absMiddle] align=[/img]有效。这三种抗生素均用PBS配[img=absMiddle] align=[/img]250X浓缩液,-20℃保存备用,使用浓度Cip为10μg/mL,BM-1为10μg/mL,BM-2为5μg/mL。使用时先吸除污染的培养液,加入含BM-1的RPMI1640培养液,3天后再吸除培养液,加入含BM-2的RPMI1640培养液,培养4天,如此连续3个轮次,直至用33258荧光染色镜检证明已清除支原[img=absMiddle] align=[/img]后,再加正常培养液培养传代3-4次。
2、加温处理
将污染的组织培养物放在41℃培养18小时,可杀死支原[img=absMiddle] align=[/img],但对细胞有不良影响。所以在处理前[img=absMiddle] align=[/img]进行预试验,摸索能最大限度杀死支原[img=absMiddle] align=[/img]又对细胞影响最小的加热时间。此法有时不可靠。若先用药物处理后,再以41℃加温处理效果更佳。
3、使用支原体特异性血清
用5%的兔支原[img=absMiddle] align=[/img]免疫血清(血凝效价1:320以上)可去除支原[img=absMiddle] align=[/img]污染,[img=absMiddle] align=[/img]特异抗[img=absMiddle] align=[/img]可抑[img=absMiddle] align=[/img]支原[img=absMiddle] align=[/img]生长,故经抗血清处理后11天即转为阴性,并且5个月后仍为阴性。但此法比较麻烦,不如用抗生素方便、经济。
4、其他方法
除了上述去除污染的方法外,还有动物[img=absMiddle] align=[/img]内接种除菌法、巨噬细胞吞噬法、污染培养瓶中加溴尿嘧啶再用光照射的方法及过滤法等,但均较麻烦,且效果不确定。所以一旦支原[img=absMiddle] align=[/img]污染,除非有特别重[img=absMiddle] align=[/img]价值,一般均弃之重新培养。