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主题：【求助】液相检测氨基酸-组氨酸和甘氨酸分不开

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zhangdp
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发表于：2011/06/25 15:47:48 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
最近做氨基酸检测，用OPA-MPA衍生后，液相色谱荧光检测，c18的柱子
其他氨基酸都分得挺好，就是组氨酸和甘氨酸完全分不开，就看到一篇中文文献里也是这个情况。
我估摸着是哪个细小环节没处理好，有经验的大虾指点下
缓冲盐试过磷酸盐和乙酸盐的，各自都加了四氢呋喃，乙腈，以及3乙胺等试过，走梯度，都是一样的，2个分不开。
附图，大家看看，红圈的地方就是甘氨酸和组氨酸的出峰时间
谢谢
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2011/6/25 17:01:51 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你可以先用用仪器公司的条件试试
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2011/6/25 18:34:13 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
仪器公司的条件基本都用他们的柱子，比方安捷伦的AAA柱，我这没有，只有c18的柱子。我用的方法基本都是各个文献上的条件，哎，差距咋就这么大呢
他们组氨酸都是跟在丝氨酸后面出来，和丝氨酸比较靠近，我的就和甘氨酸靠近哩
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2011/6/25 18:35:58 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
文献上也挺多c18柱子的。
现在去试试看氨基酸标样（单标，固体）用0.2M盐酸溶解后再去衍生化进样看看
明天来看结果
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zhangdp
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2011/6/26 15:20:17 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
解决了，原来那柱子可能柱效不行了，换了根新柱子，改了梯度，能完全分开了，先甘后组
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