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凝胶色谱（GPC）
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主题：【求助】色谱检测方法问题，谢谢啦。。

浏览0 回复6 电梯直达
ybhetao5
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发表于：2011/12/25 14:38:00 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
求助关于凝胶色谱（GFC）的相关问题
我是一个凝胶色谱的新手，之前只用葡聚糖凝胶做过分离，还是自己装的柱子，这次要做一种药的含量测定，美国药典已有方法，用了PolySep-GFC-P3000的柱子，打听了一下要8000多，有点贵，想找找有没有类似的柱子可能会便宜点，虽然有一点现成的资料，但我也要知道原理才行啊！这样问题就出来了，刚刚在网上找了半天，发现对于凝胶色谱的资料很少，而且大部分还是GPC的，图书馆也去了，没有收获。以下是我的问题：
  1.用凝胶色谱测定分子量和质量分布的原理是什么呢？我知道凝胶色谱的分子排阻原理，这和测分子量有什么关系呢？色谱图的横坐标是时间吗？还是别的单位？
  2.我要做的物质是含量测定，这是一种多取代混合物，其主成分的分子量范围是1000多到2000多（就是我要测含量的部分），当然也有一些小分子量的杂质，大部分不超过1000，那我在选择柱子（主要是排阻限）时有没有什么原则或依据呢？（虽然美国药典有明确的方法和柱子，我还是想知道）
  3 对于GFC的凝胶应该也有好多种，他们之间只是在分离中分子量的差别吗？性质上有没有差别？拿我的情况为例吧，我要对一水溶性药物做含量测定，在选择柱子时只需考虑两点：1 用于水溶性的凝胶 2 选择合适的能分离的分子量。这就够了，也就是说如果有两种不同的凝胶，只要能满足上述两点，那我用哪种都能达到实验目的，这样理解对吗？

先谢谢给位老师朋友不吝赐教！
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2011/12/25 14:45:12 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
明确规定的柱子就不要换了，换别的做不出来更浪费。
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2011/12/27 9:33:13 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
据我的实践，凝胶色谱（GFC）分离样品结果有时难以预测，不像C18，人们研究的已经很透了，所以我也是建议你不要换柱子，就像2楼所说。
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2011xiaolong
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2011/12/27 10:48:21 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
凝胶色谱现在新开了版面，给你转过去吧
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流云刃
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2012/2/3 9:37:34 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1.用凝胶色谱测定分子量和质量分布的原理是什么呢？

柱填料凝胶具有不同尺寸的孔穴，凝胶孔径与分离组分分子大小相应，当大小不同的组分分子随流动相进入凝胶，他们进入微孔的程度不同，大分子不能进入孔穴，而分子越小进入微孔越深。因而保留时间不同。试样中各组分按分子大小进行洗脱。

我知道凝胶色谱的分子排阻原理，这和测分子量有什么关系呢？

可以根据已知分子量的物质，通过收集每一分钟的洗出物，作出一条直线，然后再在这条线上找出你的物质的分子量

色谱图的横坐标是时间吗？还是别的单位？

时间
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2012/2/3 9:46:00 Last edit by wupu163
流云刃
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2012/2/3 9:38:57 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
2.我要做的物质是含量测定，这是一种多取代混合物，其主成分的分子量范围是1000多到2000多（就是我要测含量的部分），当然也有一些小分子量的杂质，大部分不超过1000，那我在选择柱子（主要是排阻限）时有没有什么原则或依据呢？（虽然美国药典有明确的方法和柱子，我还是想知道）


你的排阻限选择应该是1000，而且可以通过流速控制，达到一个分离效果
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流云刃
wupu163
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2012/2/3 9:40:08 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
3 对于GFC的凝胶应该也有好多种，他们之间只是在分离中分子量的差别吗？性质上有没有差别？拿我的情况为例吧，我要对一水溶性药物做含量测定，在选择柱子时只需考虑两点：1 用于水溶性的凝胶 2 选择合适的能分离的分子量。这就够了，也就是说如果有两种不同的凝胶，只要能满足上述两点，那我用哪种都能达到实验目的，这样理解对吗？


机械填装的柱子会比手工填装的好很多，如有不明白可以加我QQ385564952
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手机版： 色谱检测方法问题，谢谢啦。。
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