本法适用于水溶性乳剂半固体状颜料中非无菌产品的细菌测试。

3、设备和材料：

3.1高压蒸气灭菌炉；

3.2臭氧消毒箱；

3.3培养箱30℃－35℃；

3.4恒温水浴锅46℃±1℃；

3.5冰箱；

3.6天平；

3.7 三角瓶；

3.8灭菌刻度吸管（1ml.10ml）或一次性吸头（1ml.0.1ml）；

3.9灭菌平皿（直徑9cm）；

3.10吸耳球或移液枪；

4、培养基和试剂：

4.1Caseinsoya bean digest agar（胰酶大豆琼脂）；

　　　成分:Pancreatic digest of casein（胰蛋白胨）15.0g

Papaicdigest of soya bean（大豆蛋白胨）5.0g

Sodiumchloride（氯化钠）5.0g

Agar（琼脂）15.0g

Purifiedwater 1000 ml

　　　制法:将胰酶大豆琼脂干粉培养基按产品标签说明加与适量纯水中，溶解混匀后至高温灭菌锅中121℃灭菌15分钟备用。

4.2 0.85﹪生理盐水；

制法：称取8.5gNaCL溶于1000ml蒸馏水中，121℃20分钟高压灭菌，储存备用。

4.3 75%乙醇；

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5、样品的采集：

用无菌药匙混匀称取10g，加到90ml灭菌生理盐水的三角瓶中，充分振荡混匀。

6、操作步骤：

6.1用灭菌吸管吸取1：10稀释的检样2ml，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿1ml另取 1ml注入到9ml灭菌生理盐水试管中，更换一支吸管，并充分混匀，使成1：100稀释

液。吸取2ml，分别注入到两个平皿内，每皿1ml。如样品含菌量高，还可再稀释成

1：1000,1：10000等，每种稀释度应换1支吸管；

6.2 将熔化并冷却至45～46℃的胰酶大豆琼脂培养基倾注平皿内，每皿15-20ml，另倾
注一个不加样品的灭菌空平皿，作空白对照。随即转动平皿，使样品与培养基充分混合

均匀，待琼脂凝固后，翻转平皿，30-35℃培养箱内培养3～5天，观察并计数。

7、菌落计数及报告方法：

7.1作平皿菌落计算时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各

平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数。在求同稀释度的平均数时，若其中

一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿作为该

稀释度的平均菌落数。若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落数分布又很均

匀，则可将此半皿计数后乘以2以代表全皿菌落数。然后再求该稀释度的平均菌落数；

若所有稀释度均不在30-300区间。如均大于300，则取最高稀释度的平均菌落数乘

稀释倍数报告之。如均小于30，则以最低稀释度的平均菌落数乘稀释倍数报告之。如

菌落数有的大于300，有的又小于30，但均不在30~300之间，则应以最接近300或

30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。如所有稀释度均无菌落生长，则应按小于1乘

以最低稀释倍数报告之；

7.3不同稀释度的菌落数应与稀释倍数成反比（同一稀释度的二个平板的菌落数应基本

接近），即稀释倍数愈高菌落数愈少，稀释倍数愈低菌落数愈多。如出现逆反现象，则应视为检验中的差错；

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