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毛细管电泳（CE）
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主题：【求助】请教一个关于用毛细管电泳看蛋白和核酸的结合的问题

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ZZmOsquitO
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发表于：2012/03/10 06:35:00 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我现在在做蛋白和核酸的结合.我的蛋白和核酸可以结合. 蛋白是400多KDa的 核酸很小, 是30bp的dsDNA.

我现在的检测条件下只跑蛋白是可以跑出来的, 当我蛋白和核酸一起跑的时候, 也会在跟只跑蛋白在差不多的位置出峰. (我用的双波长检测,蛋白和核酸分别标记,所以都能看到.)

问题就是,
一起跑的时候, 出的所有峰, 都是既有蛋白又有核酸, 不管我加的比例是多少.
我就很困惑. 如果我加的核酸量很小的话,不是应该有很多游离的蛋白吗,就是说应该有的蛋白峰对应的地方是没有核酸出峰才对的啊, 为什么没有这样的峰呢, 我什么地方理解错了吗?~
请大家帮忙.谢谢~~~~!

BTW， 我用的是bare fused silica capillary， 是CZE， 不是凝胶的 谢谢~~~
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2012/3/12 3:46:56 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
大家帮帮忙呀~~谢谢~~~~·
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nini2006
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2012/3/12 14:06:23 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你用的是凝胶电泳吧？
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cpudaxiao
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2012/3/12 19:26:21 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
核酸的分子量太小，体积也太小，与蛋白结合后不足以改变蛋白的表面核电性质，所以结合蛋白没有单独出峰，调整一下缓冲液吧。
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2012/3/13 4:14:44 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 cpudaxiao(cpudaxiao) 发表:
核酸的分子量太小，体积也太小，与蛋白结合后不足以改变蛋白的表面核电性质，所以结合蛋白没有单独出峰，调整一下缓冲液吧。


不好意思啊忘了说 我用的是bare fused， 不是凝胶的 所以也看电荷的啊 核酸很负的吧应该还是有变化的吧？
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2012/3/13 4:15:17 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 nini2006(nini2006) 发表:
你用的是凝胶电泳吧？


不是 我用的是bare fused silica capillary， 忘了说了不好意思
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nini2006
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2012/3/13 11:34:57 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用CZE分离蛋白质的效果不太好的，选择其他模式吧。
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ZZmOsquitO
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2012/3/13 22:50:36 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 nini2006(nini2006) 发表:
用CZE分离蛋白质的效果不太好的，选择其他模式吧。


那如果改成CGE， 然后改更大的DNA呢？
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nini2006
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2012/3/15 15:18:38 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 ZZmOsquitO(giraffesnake) 发表:
原文由 nini2006(nini2006) 发表:
用CZE分离蛋白质的效果不太好的，选择其他模式吧。


那如果改成CGE， 然后改更大的DNA呢？

不明白你的意思，什么叫改更大的DNA？
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nini2006
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2012/3/16 0:34:02 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一般分离蛋白质这种两性样品的话可以优先考虑等电聚焦电泳（CIEF），对于DNA的分离，一般可以选择任何模式，但是尺寸分离就得使用凝胶电泳和非胶毛细管电泳。
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