主题:【分享】微生物限度、无菌检查及方法学验证问答集结帖【4】

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:菌种用20%甘油保藏,由于当时没有找到-80度冰箱,先在-20度冰箱保藏,但是转到-80度冰箱时,发现管内液体不是呈现固体冰的现象。是甘油与水没完全混匀的缘故吗?如果甘油浓度过高会有影响吗?

:液氮保存是菌悬液和甘油1:1配比的(甘油50%),20%没有问题. 液氮冷冻保藏法  (1)准备安瓿管用于液氮保藏的安瓿管,要求能耐受温度突然变化而不致破裂,因此,需要采用硼硅酸盐玻璃制造的安瓿管,安瓿管的大小通常使用75×10mm的,或能容12mm液体的。  (2)加保护剂与灭菌保存细菌、酵母菌或霉菌孢子等容易分散的细胞时,则将空安瓿管塞上棉塞,105kg/cm21213灭菌15分钟:若作保存霉菌菌丝体用则需在安瓿管内预先加入保护剂如10%的甘油蒸馏水溶液或10%二甲亚砜蒸馏水溶液,加入量以能浸没以后加入的菌落圆块为限,而后再用105kg/cm2>1213灭菌15分钟。  (3)接入菌种将菌种用10%的甘油蒸馏水溶液制成菌悬液,装入已灭菌的安瓿管;霉菌菌丝体则可用灭菌打孔器,从平板内切取菌落圆块,放入含有保护剂的安瓿管内,然后用火焰熔封。浸入水中检查有无漏洞。  (4)冻结再将已封口的安瓿管以每分钟下降1的慢速冻结至-30。若细胞急剧冷冻,则在细胞内会形成冰的结晶,因而降低存活率。  (5)保藏经冻结至-30的安瓿管立即放入液氮冷冻保藏器(图-14)的小圆筒内,然后再将小圆筒放入液氮保藏器内。液氮保藏器内的气相-150,液态氮内为-196。  (6)恢复培养保藏的菌种需要用时,将安瓿管取出,立即放入38—40的水浴中进行急剧解冻,直到全部融化为止。再打开安瓿管,将内容物移入适宜的培养基上培养。  此法除适宜于一般微生物的保藏外,对一些用冷冻干燥法都难以保存的微生物如支原体、衣原体、氢细菌、难以形成孢子的霉菌、噬菌体及动物细胞均可长期保藏,而且性状不变异。缺点是需要特殊设备。

关键词:菌种保藏 液氮冷冻保藏法







:分离的细菌如何鉴定?

:细菌的传统鉴定 1. 形态特征及染色结果 革兰氏染色 鞭毛染色 荚膜染色 细胞壁染色(NaCl法:1.1d25%NaCl溶液于洁净的载玻片上。2.挑一环培养6h的细菌在25%NaCl中涂匀,自然凉干。3.滴加0.01%的结晶紫于其上,30s后水洗干燥,油镜观察。) 抗酸染色 2. 培养特征观察取菌龄24-28h的菌3.6接种于PDA平板,PDA斜面,营养肉汤中培养24h,进行琼脂柱,明胶穿刺培养,30培养24h 3. 生理生化实验需氧性测定和运动性测定:将斜面培养24h的待测菌用接种针穿刺到培养基管底,3d后观察变化。如果菌落沿培养基表面生长,表明为好氧菌,反应为阳性,如果菌落沿穿刺线生长,反应为阴性。培养基成分:蛋白胨0.2gNaCl0.5gK2HPO40.2g,琼脂0.5-0.6g,葡萄糖1.0g,水100ml 4. 生长温度测定在肉汤培养基(外加1%葡萄糖)中用接种针接种,在恒温水浴锅中不同温度下(410152025303540455055)下培养2-5d观察生长情况,测定OD值,做温度曲线,确定最适生长温度,最高生长温度和最低生长温度。 5. PH测定在肉汤培养基(外加1%葡萄糖)中分别用HClNaOHPH3.04.05.06.07.08.09.010.0吸取定量的24h培养汤28培养24h,测培养液的OD值,做PH曲线。 6. 耐盐实验采用PDA液体培养基,分别加入NaCl,分别配成0%5%7%10%的系列浓度,采用直针接种,28培养7d,在第三天和第七天各观察一次菌株生长情况。 7. 采用西蒙斯氏柠檬酸盐培养基(NaCl0.5gMgSO4●7H2O0.02g,(NH42HPO40.1g,柠檬酸酸钠0.02g,琼脂1.2g,蒸馏水100ml,溴百里酚兰少量,斜面接种并设空白对照,28培养7d,观察显色情况。 8. 接触酶试验将待测菌菌株在PDA斜面上28培养24h,滴入10%H2O2,观察有无气泡产生。 9. 脲酶试验将待测菌接种于PDA斜面,在37天进行脲酶产生测定。方法:在空试管中,将斜面菌台做成菌悬液,加一滴酚红指示剂,调PH7,即酚红刚刚转黄呈橙黄色,再将此菌液分做2份,在其中一管中加入少量的晶体尿素(约0.05g-0.1g),另一管不加尿素作对照,观察显色情况。 10. 糖,醇类发酵试验培养基:(NH42HPO40.1gMgSO4●7H2O0.02g,酵母浸膏0.02g,琼脂0.5-0.6g,葡萄糖0.1g,水100ml。秀甲酚紫少许中加入1%甘油,木糖,三梨醇,蔗糖,甘露醇,阿拉伯糖代替葡萄糖。将斜面培养24h的待测菌穿刺到上述培养基上培养5d,观察培养基的变化情况。 11.V-P试验于液体培养基(蛋白胨0.5g,葡萄糖0.5gNaCl0.05g,蒸馏水100mlPH7.0-7.2)中接种待测菌菌株,2d后取出培养液和40%NaOH等体积混合,加入少量肌酸猛烈震荡3Min后,观察培养液的颜色变化。 12.硝酸盐还原试验将待测菌接种于硝酸盐液体培养基(肉汁胨培养基1000mlKNO310gPH7.0-7.22管做空白对照,培养2d后,取2支干净的空试管倒入少许培养液,各滴入1dA液(对氨基苯磺酸0.5g10%稀醋酸150ml)及B液(ā-萘胺0.1%,蒸馏水20ml10%稀醋酸150ml)对照管中同样加入AB液各一滴,观察颜色变化。 13.淀粉水解将培养基(肉汁胨中加入2%的可溶性淀粉)倒成平板,倒置过夜后,接种新鲜的菌种,28培养48h,待形成菌落后,滴加2滴碘液于菌落周围,观察菌落周围培养基颜色的变化。 14.明胶液化培养基(蛋白胨0.5g,明胶10-15g,蒸馏水100mlPH7.2-7.4)取24h培养菌穿刺接种,设空白对照于20培养箱中培养,观察明胶的液化情况。 15.H2S试验产生试验培养基(蛋白胨1gNaCl0.5g,牛肉膏0.75g,明胶10-12gFeCl2微量,水100gPH7.0)穿刺接种,30培养观察培养基的颜色变化。 16.M.R.试验(甲基红)培养基(蛋白胨0.5g,葡萄糖0.5gNaCl0.05g,水100mlPH7.0-7.2)接种待测菌菌株于培养基中30培养6天,在培养液中加入一滴甲基红试剂,观察颜色变化。 17.纤维素分解实验采用蛋白胨液体培养基接种待测菌,同时浸泡一条灭菌的优质新化滤纸,观察1-4周滤纸片的变化情况。

关键词:细菌鉴定







问:什么是抗酸染色法?

答:抗酸性杆菌(结核杆菌、麻风杆菌等)用一般染色不易着色,需用强染剂(5%石炭酸复红溶液)加温或延长染时间才可着色,但着色后不易被3%盐酸酒精脱色,而被染成红色。非抗酸性菌易被盐酸酒精脱色,为美兰液复染成蓝色。 1、抗酸染色法原理 一般认为抗酸性菌体内含脂类物质较多(含水量量可高达40%),如结核杆菌体内含有分枝菌酸(是脂类),此物质具有抗酸的性质。染色时,它与石炭酸复红结合牢固,能抵抗酸性酒精的脱色作用,同时脂类又不易透过细胞膜,不能被脱色,因此抗酸菌能保持复红的颜色。相反,非抗酸性菌体内含脂类少,易被酸性酒精脱色,脱色时又易从细胞膜渗出而脱掉,最后被复染成蓝色。 2、染色方法 (一)将涂片以火焰固定后,滴加石炭酸复红染液,以弱火徐徐加温,使染液微冒蒸气,切勿加温过高或使染液蒸干,如此维持约5分钟。(二)待标本冷却后,水洗。(三)用3%盐酸酒精脱色1/2-1分钟,脱色时轻轻摇晃玻片,直至涂片无色脱出或稍呈粉红色时为止。(四)水洗后,用110稀释硷性美兰复液1/2-1分钟。水洗、干后镜检。

关键词:抗酸染色法

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问:干混悬固体制剂的微生物验证。一般是采用离心+薄膜过滤的方法进行验证的。可是这个品种太粘稠,离心没有任何作用。取110的供试液1ml仍然不行.后来考虑到用B-内酰氨酶来消除抑菌性,B-内酰氨酶是中检所提供的,不知用量一般如何来定?

答:用量一般应为培养基的2%,要经过验证的程序才能确证。

关键词:干混悬 B-内酰氨酶

提议:应在工具书添加一下内容:常用菌的中英文名对照表 常用菌形态照片 已验证品种的参考方法 实验室、洁净度认可文件 CHP USP EP 相关附录的摘选





问:平板菌落计数法的计算方法:假设有三个稀释梯度,每个梯度有三个平板,总共九个数据,请问数据如何取舍及最后CFU的计算方法

答:一般来说以平板上的菌落数介于30-300个的为准,用菌落数乘以稀释度再根据你涂平板的菌液量来计算CFU,如果有两个稀释度的菌落数都是介于30-300之间,则分别计算不同稀释度的菌落数,然后再平均。同一稀释度的三个平板如果菌落数都差不多,则分别计算CFU再平均,如果有一个和其他两个差异很大,则建议取那两个差异不大的平均或者再重复涂平板一次。不过菌落计数计算的只是活菌数,如果要计算总菌数,则最好用计数板,一般的血细胞计数板由于太厚,不能用油镜,只能用于酵母菌计数,细菌的话要用细菌计数板。细菌菌落计数一般采用9厘米平皿,倾注法培养后计数选取30300间的稀释度计数并乘以相应稀释陪数如若两个稀释度均在30300 则以其各自稀释度下计算的菌落数相除比值小于2 取两稀释度的平均值如若大于2,则取稀释度小的那个计算菌落数。当然了,同一稀释度下的3个平皿自然是取3个平皿的均值。

关键词:平板菌落计数法







微生物系列名词解释 A

微生物(Microbe): 微观的生物机体。是形体微小、单细胞或个体结构简单的多细胞、甚或无细胞结构的低等生物的通称。(细小的肉眼看不见的生物) 微生物(Microorgamism): 微观的生命形式。微生物学(microbiology):研究微生物生命活动的科学。微米(Micrometer): 一种测量单位:1/1,000mm,缩写为um。原核微生物(prokaryotic microbe):指核质和细胞质之间不存在明显核膜,其染色体由单一核酸组成的一类微生物。原核细胞型微生物(procaryotic cell microbe):指没有真正细胞核(即核质和细胞质之间没有明显核膜)的细胞型微生物。真核细胞型微生物(eukaryotic cell microbe):指具有真正细胞核(即核质和细胞质之间存在明显核膜)的细胞型微生物。真菌(fungi):有真正细胞核,没有叶绿素的生物,它们一般都能进行有性和无性繁殖,能产生孢子,它们的营养体通常是丝状的且有分枝结构,具有甲壳质和纤维质的细胞壁,并且常常是进行吸收营养的生物。霉菌(Mold): 具有丝状结构特征的真菌。细菌(bacterium):单或多细胞的微小原核生物。病毒(virus):是一类没有细胞结构但有遗传复制等生命特征,主要由核酸和蛋白质组成的大分子生物。是比细菌更小的专性细胞内寄生的微生物,大多数能通过细菌过滤器。放线菌(actionomycetes):一目形成真的菌丝成分枝丝状体的细菌。蓝细菌(cyanobacterium):是光合微生物,蓝细菌是能进行光合作用的原核微生物。原生生物(protistan):指比较简单的具有真核的生物。原生动物(protozoa):单细胞的原生生物。免疫学(immunology):研究利用预防接种法治疗疾病的科学。立克次氏体(Richettsia):节肢动物专性细胞内寄生物,它的许多类型对人和其它动物是致病的微生物。感染(Infection): 宿主由于微生物生长的病理学状况。巴氏灭菌法(pasteurization):亦称低温消毒法,冷杀菌法,利用较低的温度既可杀死病菌又能保持物品中营养物质风味不变的消毒法。巴斯德消毒法(Pasteurization):在一控制温度给液体食物或饮料加热以提高保藏质量,同时也消毀有害的微生物。无菌的(Aseptic):没有能够引起感染或污染的微生物。化学疗法(chemotherapy):用化学药物来治疗传染病。化学治疗(Chemotherapy):用化学制品治疗疾病。抗生素疗法(tetracycline):用真菌等生物产生的抗生素来治疗疾病。分类学(Tasonomy) 尽可能有亲缘关系基础上对有机体的分类。无性繁殖系(Clone):从单一细胞传下来的细胞集群。属(Genus):一组亲缘关系非常接近的种。分辨率(resolving power):能够分辨出两者之间最小的距离。菌株(Strain):单一分离体后代组成的微生物纯培养物。污染:微生物纯培养物和灭过菌的物品等被某些杂菌或有害微生物混人或沾染的现象。球菌(coccus): 球状的细菌。杆菌(bacillus): 杆状的细菌。螺旋状细菌(Spirillum): 螺旋状的或开塞钻状的细菌。(呈弯曲状的细菌)螺旋体(Spirochete): 螺旋形细菌;多为寄生性的。梅毒(Syphilis):由梅毒密螺旋体引起的一种性病。链球菌(Streptococci):分裂后细胞成链的球菌。弧菌:菌体呈有一个弯曲呈弧形(即弯度一圈)。螺菌:菌体较为坚硬有多个弯曲。衰老型、退化型:细菌在老的培养物中会出现各种与正常形状不一样的个体,重新培养有些可以恢复,有些不可以恢复原来的形状。细菌多型性:有些细菌尽管在最适宜的(正常的)环境中生长,其形态也很不一致。菌柄(Prosthecas):在诸如柄杆菌属的细菌中,作为细胞壁的一部分的附器。球状体(球形体,spheroplast):多用革兰氏阴性细菌,以溶菌酶法处理获得,其外壁的结构尚存,所以,原生质体对外界环境具一定抗性,并能在普通培养基上生长的细菌菌体。细菌细胞壁(cell-wall):包在表面较坚韧略具有弹性的结构,是一层较薄的膜状结构。核(Nucleus):细胞内结构,含有染色体。细胞膜(cell membrance):是细胞壁和原生质之间一层柔软并具有半透性的生物膜(又叫质膜、原生质膜、胞浆膜)。革兰氏染色法(Gram stain):一种鉴别染色法,当用脱色剂处理时,根据保留或失去原始着色剂(结晶紫)与否,细菌被划分为革兰氏阳性或革兰氏阴性。核仁(Nucleolus):细胞核中的一种小体。核糖体(Ribosome):由RNA和蛋白质组成的细胞质结构单位,为蛋白质合成地点。核糖核酸[Ribonucleic acid (RNA)]:见于细胞质和核仁的核酸;含有磷酸,D-核糖,腺嘌呤,鸟嘌呤,胞嘧啶和尿嘧啶。核酸(Nucleic acid):一类由核苷酸复合物连接构成的分子;其类型有脱氧核糖核酸和核糖核酸。核蛋白(Nucleoprotein):由核酸和蛋白质组成的复合物分子。组蛋白:存在于真核细胞内的一类碱性蛋白(其作用之一是使大量遗传信息压缩在核内)质粒:细菌除了原核以外,还有染色体外遗传因子(为环状DNA分子,能自我复制)
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微生物系列名词解释 B

细胞间的(Intercellular):在细胞之间。细胞质(Cytoplasm):细胞膜和核之间的细胞生活物质。细胞器(Organelle):细胞的结构或组分。荚膜(Capsule):围绕某些微生物细胞壁的一种胶状包被或粘液层。(细菌细胞壁外的一层较松厚,而且较固定的粘液性物质)。粘液层:细菌细胞壁外的一层较松厚,而且较固定的没有明显的边缘粘液性物质。菌胶团:如果细菌荚膜连在一起,其中包含有许多细菌叫菌胶团。细菌的化学趋避运动:细菌趋势向吸引物并聚集于浓度区或与避离排斥物,菌体集中在低浓度区,蛋白质为接受物。细菌的光趋避运动:先培养在具有弱光的液体培养基中,用强光照射某一区域,通过10—100分钟,通过鞭毛运动,集中在强光照射区。鞭毛(Flagellum): 细胞上柔软的鞭状的附器(细长的原生质突起),作为一种运动器官。一端单毛菌:菌体一端只有一条鞭毛。二端单毛菌:菌体二端各有一条鞭毛。丛毛菌:菌体一端成二端各有一丛鞭毛(偏端丛生鞭毛菌、二端丛生鞭毛菌);周毛的(Peritichous):围绕细胞整个表面长着鞭毛。周毛菌(Peritichous flagellum bacterium):在菌体四周都有鞭毛。伞毛(Fimbriae): 某些革兰氏阴性细菌的表面附器,由蛋白质亚单位构成,直径大约为7nm.它们比鞭毛短些、细些。也叫做纤毛。线毛(Pili,散毛,纤毛,菌毛):比鞭毛更细,较短,直硬,数量也较多的细丝。核蛋白体(核糖体):细胞质中无胞膜的颗粒结构 ,直径150-200埃。中间体(中体):包围质的膜折皱陷入到质细胞里的结构。异染颗粒:用染料多色美兰染色,菌体部分兰色颗粒红紫色,故称异染颗粒。脂类颗粒:细菌在代谢过程中积累起来,但不能被细菌作养料脂类颗粒。多糖颗粒:有糖原和淀粉二类颗粒,可作为细菌的能量来源。液泡(Vacuole):细胞质内清晰的空间。芽孢(内生孢子Endospora):某些细菌生长到一定阶段,有细胞内形成一个圆形成圆柱形的对不良环境条件具有较强的抵抗力休眠体叫之。孢囊(cytocyst):由营养细胞缩短变成球菌,表面形成一层厚的孔壁称之。伴孢晶体(parasporal crystal):某些芽孢杆菌,如苏云金杆菌,在细胞内产生一种晶体状多肽类内含物称之。裂殖生殖(Schixoteny):营养体多重分裂的无性生殖。裂殖(schizogenesis):表现为细胞的横分裂称为裂殖。异形裂殖:裂殖后形成子细胞与母细胞大小不相等,称为异形裂殖。同形裂殖:裂殖后形成子细胞与母细胞大小相等,称为同形裂殖。裂殖体(Schizont):疟疾寄生物无性生活周期的一个阶段。菌落(集落bacterial colony):固体培养基上肉眼可见的微生物生长物(微生物的单个个体或孢子在固体培养基上生长繁殖后形成肉眼可见的集团) 菌苔(bacterial lawn):几个菌落连在一起成片生长。培养基(media):是人工配制的适合于不同微生物生长繁殖或者积累代谢产物的营养基质。琼脂(Agar-agar):红色海藻经过干燥的多糖抽提物,在微生物学培养基中用以作为一种凝固剂。基内菌丝(营养菌丝,substrate mycelium),长在培养基内的放线菌菌丝。菌丝无分隔,可以产生各种水溶性、脂肪性色素,使培养基着色。气生菌丝(二级菌丝):由基内营养菌丝长出培养基外伸向空间的放线菌菌丝。气生菌丝直生或分枝丝状,较基内菌丝粗。孢子丝(sporotrichial):当生长发育到一定阶段,在其气生菌丝上分化出可形成孢子的放线菌菌丝。水华或水花(Bloom):在水中有大量的蓝细菌生长,繁殖茂盛,使水随的颜色随藻类的颜色而变化,许多细胞集结在一起形成水华水花(由大量浮游生物生长所引起的水体表面呈色区) 共生关系(symbiotic system):几种生物在有机联系的共生条件下互相得益的关系,有的共生达到了彼此不能分离的程度,或若分离后生长不良。地衣(lichen):蓝细菌与真菌形成的共生体。隔膜(Septum):菌丝体中的模壁。菌丝(hypha):多数真菌的典型营养体呈现丝状或管状单一的细丝叫菌丝(叫菌丝)。菌丝体(mycelium):由许多菌丝连结在一起组成的营养体类型叫菌丝体。有隔菌丝(Septa hypha):真菌有隔膜的菌丝叫有隔菌丝。无隔菌丝(Non-septa hypha):真菌没有隔膜的菌丝叫无隔菌丝。 Z型菌丝(Z-hypha):有些真菌的营养体类型,在寄主体内和人工培养基上是两种不同类型的菌体称之。吸器(吸胞)(Haustorium): 真菌菌丝某处生出特殊形态的菌丝体或菌丝的变态物,伸入寄主体内吸取养分,这些变态物叫吸器。菌环(菌套annulus): 捕食性真菌形成环状,叫菌环(菌套)。菌网(macterial net): 捕食性真菌形成网状,叫菌菌网。假根(Rhizoid):一种单一的或多细胞的在菌丝下方生长出发丝状根状菌丝,伸入基质中吸收养分并支撑上部的菌体,呈根状外观。菌核(Sclerotium):真菌生长到一定阶段,菌丝体不断地分化,相互纠结在一起形成一个颜色较深而坚硬的菌丝体组织颗粒。子座(Stroma):是菌丝分化形成的垫状结构,或是菌丝体与寄主组织或基物结合而成的垫状结构物。菌索(Rhizomorph):是菌丝体集合形成的绳状结构。多生于树皮下或地下,形似根状结构物)菌丝束(hyphal strand):菌丝平行排列的绳状结构。蕈菌()(fungal):由大量菌丝紧密结合形成的真菌子实体。真菌鞭毛(cilium):是单独的细胞器,不是孢子体躯的延伸,它来源于中心粒系统,由9+2根微管(31根亚纤丝)组成结构物。接合孢子(zygospore):是接合菌的有性孢子,由菌丝长出形态相同或略有不同的配子囊接合而成。子囊孢子(ascospore):子囊菌的有性配子或生于子囊内的有性配子叫之。担孢子(basidiospore):担子菌的有性孢子为担孢子,是一种外生孢子。半知菌(fungi imperfecti):因为只了解其生活史的一半,因此常称为半知菌。食用菌(edible fungi):泛指所有可以吃食的真菌。食用菌(edible mushrooms):指真菌中有肥大肉质和胶质的繁殖器官(子实体),可以供人类吃食的大型的丝状真菌。毒伞菌(poisonous mushrooms):能产生毒素的大型的丝状真菌。发酵(ferment):泛指一切利用微生物或酶制剂的生产过程。营养体(nutrition body):真菌营养生长阶段的结构称为营养体。无性孢子(a***ualspore): 无性繁殖产生的孢子称无性孢子。有性孢子(***ualspore): 有性繁殖产生的孢子称有性孢子。游动孢子(zoosporangiospore:鞭毛菌产生的无性孢子。由割裂方式产生,有鞭毛,在在水中游动。孢囊孢子(sporangiospore):接合菌产生的无性孢子。由割裂方式产生,无鞭毛,不能游动。分生孢子(Conidium):一种无性孢子,可以为一到多个细胞的,和有许多不同的形状(子囊菌、担子菌、半知菌产生的无性孢子, 大多由芽殖、裂殖方式产生)。厚垣孢子(chlamydospore:各类真菌均可形成的无性孢子,由断裂方式产生,壁厚,寿命长,能抗御不良外界环境。(一种厚壁的有抵抗能力的孢子,由菌丝体直接分第而来,菌丝体内原生质和营养物质集中)休眠孢子囊(resting sporangium):是某些低等鞭毛菌的有性孢子,由鞭毛菌同型两性接合生育而成。卵孢子(oospore):是鞭毛菌中卵菌的有性孢子,由异型两性接合生育而成。原配子囊:接合菌相接近的+两种菌丝各自向对方生出极短的侧枝叫原配子囊。接合孢子(zygospore):是接合菌的有性孢子,由菌丝长出形态相同或略有不同的配子囊接合而成。接合菌:指产生一种叫接合孢子的休眠孢子。接合子(Zygote):由两个配子交配而产生的机体。子囊孢子(ascospore):子囊菌的有性配子或生于子囊内的有性配子叫之。担孢子(basidiospore):担子菌的有性孢子为担孢子,是一种外生孢子。接合作用(Conjugation):一种配偶暂时融合的交配过程;尤其见于单细胞有机体。子实体(fructification):真菌的产孢结构。担子果或子实体(sporophore):高等担子菌中,产生一种高度组织化结构(包括担子和担孢子),称为担子果或子实体。担子子实层:担子排列的层叫担子子实层,除担子外,还有刚毛、囊状体。匍匐丝(又叫蔓丝):根霉菌体有一部分呈弧形,在培养基表面水平生长,根霉的气生性强,大部分菌丝上匍匐于营养基质表面的气生菌丝。(联结假根之间的菌丝) 假根(pesudorhiza):匍匐菌丝在接触培养基处伸入培养基内呈分枝状生长的菌丝。同宗结合(homothallic):单个菌株能完成有性交配。异宗结合(heterothallic):单个菌株自身不孕,必须与另一菌株相对应的性器官配合才能完成有性交配。子囊子实层(ascusic hymenium):子囊排列的层叫子囊子实层,子实层除子囊外,还有则丝、不育丝。子实层(hymenium):子囊着生在一个盘状开口的子囊果内。子实体(Fruiting body):一种特化的产生孢子的器官。(真菌的产孢结构)子囊(Ascus):子囊类特征的囊状结构,里面产生子囊孢子。(一种囊状产孢结构,球形、棒形成圆筒形) 子囊壳(Perithecium):球形、圆筒形或卵形的子囊果,它通常在顶部开一条裂缝或小孔。子囊孢子(ascospore):子囊菌的有性配子或生于子囊内的有性配子叫之。子囊果(ascocarp):子囊菌亚门真菌产生子囊孢子的结构闭囊壳(子囊球cleistothecium):子囊被包在一个球形无孔的子囊果中。子囊盘(apothecium):呈盘状、碗状成漏斗状,顶部敞开的叫子囊盘。假囊壳(pseudothecium):子座内只有一个子囊腔,顶端有溶化的假孔口。子囊座(ascostroma):子囊座瓶状、盾状或船状等,子座内有1至多个子囊腔,有或无孔口。子囊腔(locule): 子囊座内着生子囊的腔。担孢子(basidiospore):担子菌的有性孢子为担孢子,是一种外生孢子。担子果或子实体(basidiocarps):高等担子菌中,产生一种高度组织化结构(包括担子和担孢子),称为担子果或子实体。裸果型担子果:子实层自始裸露于外。被果型担子果:子实层包在子实体内,孢子在担子果分解或遭遇外力破裂时才释放于外。半被果型担子果:子实层初期被菌幕所覆盖,成熟后全部裸露于外。担子子实层:担子排列的层叫担子子实层,除担子外,还有刚毛、囊状体。生活史:微生物一生中所经历的发育和繁殖阶段的全部过程。初生菌丝(一生菌丝):是由担孢子萌发产生的单核单倍体的菌丝。次生菌丝(二生菌丝):是由初生菌丝联合进行质配而不进行核配的双核菌丝。三生菌丝:是组织化的特殊的一些双核组织菌丝,常集结成特殊的形状的子实体即蕈子蕈菌():由大量菌丝紧密结合形成的真菌子实体。锁状联合(clampconnection):担子菌的次生菌丝每一个细胞都有二个核,其中一个核来自母本,一个来自父本,当双核细胞进行细胞分裂时,在二个核之间处生一个短小弯磨曲的分枝,核移动,在二核之间生出一个突起如钩状,一个核进入钩一个留在菌丝钩中保留一个核,一个往后移,菌丝中二个核一往前一个往后移钩状突起向下弯曲与细胞壁接触溶化,分枝基部生分隔膜(分隔中间有孔道),在原分支外形成一隔膜,产生一个新细胞双核体,在分隔处保留一个桥形结构叫之。蘑菇圈、仙人圈(fairy ring):是由于菌丝辐射生长的缘故。菌丝由中间一点向四周辐射生长,时间长了,中心点及老化的菌丝相继死去,外面的生活力强,于是形成了自然的菌丝体环。菌托(teleoblem):包在担子果子实体的菌柄基部的膜状物。(子实体幼小期包有一层外膜,当菌柄伸长时,外膜破裂残留在菌柄基部形成菌托) 菌环(annulus):围绕菌柄的一个环状物。菌柄(stipe):伞菌子实体的柄。位于菌盖下面,有正中生、侧生、偏生。菌盖(cap):子实体的帽状部分。位于菌柄上方。菌褶(gill):菌盖下方与菌肉相连的部分, 菌褶似刀片呈辐射状排列。半知菌(fungi imperfecti):因为只了解其生活史的一半,因此常称为半知菌。分生孢子梗(Conidiophore):从菌丝体上形成分化程度不同的产生分生孢子的结构。(菌丝体的分枝,其上着生分生孢子)分生孢子座(Sporodochidium):分生孢子梗以聚生的着生形式聚集成垫状的短梗形式,顶端产生分生孢子,形成孢子座的结构。束丝:以聚生的着生形式形成一束排列较紧密的直立分生孢子梗,顶端或侧面产生分生孢子。分生孢子盘(Acervulus):半知菌形成盘状的孢子果。分生孢子器(Pycnidium):半知菌形成球状的孢子果。酵母菌(yeast):指一群单细胞的真核微生物(单细胞的不具典型菌丝体特征的一类真菌) 假菌丝体(pseudomycelium):单细胞菌体互相连接在一起成为一串细胞象菌丝称之。二型现象(dimorphism):一定条件下形成单细胞菌体,另一条件下则形成菌丝体。蕈菌()(fungal):由大量菌丝紧密结合形成的真菌子实体。出芽(Budding):酵母无性生殖的典型形式,在此过程中多亲代细胞长出一个新的细胞。地衣(Lichem):藻类和真菌类共生,互惠的结合物。黄曲霉毒素(Aflatoxin):一些真菌(黄曲霉)品系产生的毒素;一种致癌物。菌根(Mycorrhiza):真菌和高等植物的根的共生联系。假根(Rhizoid):一种单一的或多细胞的发丝状结构,呈根状外观。游动孢子(Zoospore):运动的有鞭毛的孢子。藻菌植物(Thallophyte): 不具真正的茎、根或叶的植物;包括藻类和真菌。白僵菌(Beauveria):半知局亚门,菌丝有横隔有分枝的真菌。白僵菌可以侵入6个目15200多种昆虫、螨类的虫体内大量繁殖,同时不断产生白僵素(大环脂类毒素)和草酸钙结晶,这些物质可引起昆虫中毒,使体液发现机能发生变化,打乱新陈代谢以致死亡。绿僵菌(Beauveria):与白僵相似,菌体橄榄绿色。病毒学(virology):研究病毒的科学。滤过性病毒(Filterable virus):能够通过细菌过滤器小孔的微生物。二十面体(Icosahedron):许多病毒粒子的几何形状;二十个三角面和二十个角。 干扰素(Ioterferon):动物组织产生的抗病毒物质。病毒粒子(病毒个体virus particle):是成熟的、完整的、有感染性病毒颗粒。壳体(capsomers):由多个衣壳粒组成的蛋白质外壳。 核壳体(核衣壳):是衣壳与其包围着的核酸的总称。 衣壳粒(capsomer):衣壳单个的蛋白质亚单位。病毒的最小形态单位,由一种或几种多肽链折叠而成的蛋白质亚单位。 衣壳(capsid symmetry):衣壳粒以对称形式有规律地排列,形成的蛋白质外壳。 封套(envelope):一般由含有类脂或脂蛋白质组成的包围着病毒核壳体的包膜。 细菌过滤器(Filter,bacterial):细菌不能通过的特殊类型的过滤器。 寄生现象(Parasitism):被寄生物感染的状态。 专性寄生:寄生的一种类型,只能依赖活的寄主生存,脱离寄主不能生活和繁殖)。 接种(Inoculation):人为地把微生物或物质引进体内或培养基。 接种物(Inoculum):含有微生物的材料,用于接种。 溶菌现象:液体培养时细菌被噬菌体裂解,液体由混浊变清的现象。 噬菌斑(phague):烈性噬菌体+敏感性细菌混合培养于固体基质中,由于噬菌体进行裂解细菌,而在营养琼脂平板上形成的透明空斑。 噬菌体(bacteriumphage):是微生物病毒,是侵染细菌、放线菌、真菌等细胞型微生物的病毒。 烈性噬菌体(lytic bacteriumphage):感染细胞后引起细菌细胞裂解的噬菌体。温和噬菌体(Temperate bacteriophage) 能与宿主细菌同步复制的噬菌体,因而在噬菌体不需引起溶菌就能通过胞分裂遗传。原噬菌体(protophage):温和噬菌体以其核酸附着在细菌染色体的一定位置上,与细菌染色体一道复制,称原噬菌体。结果:每个子细胞都成为溶解性细菌。 敏感性细菌(sensitized bacterium):被裂性噬菌体侵染的细菌。 溶源性(Lysogeny)::携带噬菌体的细菌状态,对这种噬菌体,细菌本身并不敏感。 溶原性细菌(lysogenic bacterium):含有温和噬菌体的细菌。 感病(infection disease):寄主遭受病原物的侵染而发病。 侵染力(infestation):病原微生物克服寄主防御能力,侵入体内得以生长、繁殖和扩散等一系列的性能。 病原(pathogenium):引起病害的病原生物。 抗原性:能与免疫反应产物结合的性质。 亚病毒:没有真病毒的形态结构,能利用非自身编码的酶系统进行复制,有侵染性,并可在寄主中引起症状。 类病毒(viroid):是寄生于高等生物细胞中一类最小的新病原体,有类似病毒的一面,称为类病毒。 卫星RNAstar RNA):是指一些必须依赖于辅助病毒的才能复制的小分子单链RNA片段,它被包装在辅助病毒的包体中。 拟病毒(Viroid—Like RNA):是一种类似于类病毒的病毒,其核酸组成,大小、二级结构均与类病毒相似,故又称之为类似类病毒(Viroid—Like RNA),又称为拟病毒, 朊病毒:只含蛋白质外壳不含核酸的病毒。(朊蛋白质曾用名,现已不用) CJD(Creutzfeldt-Jakob Ddisease):医源性海绵类脑血管病变或朊病毒感染,是世界性顽疾之一。病征:四肢僵值,语无论次,尿便失禁。 噬放线菌:把侵染放线菌的病毒叫噬放线菌。 噬蓝藻体(cyanophage):是侵染多种蓝藻的病毒。 噬真菌体(mycophage):是侵染多种真菌的病毒。 类菌原体(Mycoplasma like organism=MLO):又称类菌原质,它是介于病毒和细菌之间的一种单细胞微生物,比细菌小比病毒大,具有多型性,有圆形、椭圆形或不规则形,大小为200-300nm,没有细胞壁。 螺原体(Spiroplasma):呈螺旋丝状,长3—25um, 直径在100-200nm,高度变态。 菌原体(thalline):动物的微小原核原生生物,高度变态,如球状或近卵球状,直径125-250nm 类立克次氏体(Rickettsia-Lick Organism RLO):这类微生物形态结构和性状与立克次氏体极相似,故称之。 类细菌(Rickettsia-Lick Bacteria RLB): 类立克次氏体是一种小形杆状细菌,又不同于细菌,寄生于细胞内部,有细胞壁,有固定的形态,与细菌同属于一个门,又称为类细菌,一般不能人工培养。

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:大肠埃希菌在胆盐乳糖里培养基中培养18--24小时,为何有时会出现浑浊但不产气的现象呢?与哪些因素有关?(菌种/培养基?)

:大肠埃希菌[CMCCB44102]标准菌株,接种胆盐乳糖里培养基(无供试品)中培养18—24h,会出现浑浊、产气的现象。如只胆盐乳糖里培养基显浑浊,不产气,可能是菌株变异,与培养基无关。

有些大肠埃希菌包括样品中分离的污染菌株对乳糖不发酵或迟缓发酵。故它们在胆盐乳糖里培养基中培养18—24h,出现浑浊但不产气或延长培养时间,24h后产气。

关键词:大肠埃希菌





:克拉霉素分散片在 玫瑰红钠琼脂中,好像吸附了其中色素边成培养基颜色,而周围培养基变透明...为何?

:克拉霉素分散片在 玫瑰红钠琼脂中变成培养基颜色是时有的现象,而药物颗粒周围的培养基颜色被吸附,故色素减少看起来显得透明些。否则有其他反应。

关键词:色素 培养基







:多潘立酮片验证时候 -1 试验组(大肠埃希菌)的营养琼脂平板里,居然出现培养基中有气泡的现象......

:多潘立酮片验证时,大肠埃希菌在营养琼脂平板里出现气泡的现象.可能与样品中含有某种成分被大肠埃希菌分解产气,形成气泡。

关键词:营养琼脂平板 气泡





:GB/T16294-1996中规定用 营养琼脂 测定洁净室洁净度,但不少制药企业内部标准都会自行规定 用营养琼脂测定细菌,玫瑰红钠琼脂则测定真菌,会不会是自找麻烦?因为按我们积累的数据来看,玫瑰红钠琼脂比营养琼脂敏感(对于测定 真菌而言) GB/T16294-1996的制定过程中有没有注意到这个问题,或者有其高见呢?

:GB/T16294-1996中规定用营养琼脂 测定洁净室洁净度。制药企业内部标准规定 用营养琼脂测定细菌,玫瑰红钠琼脂则测定真菌。只是侧重点不同,无可非议。

关键词:营养琼脂 洁净度





:无菌室试验前紫外消毒时是否应同时开 紫外灯和日光灯?以下有2个版本的解释: a 不能同时开,波长干扰 b 应该同时开,避免光复活现象

:无菌室试验前紫外消毒时没有必要开紫外灯同时又开日光灯,避免光复活现象

关键词:紫外灯 光复活





:实用药品检验手册,TTC显色原理很简单,遇酸即显红色!那么强酸性检品在培养基中若也呈酸性,是否也会被染成红色而被误判为菌落呢?上次有位朋友说,TTC也能将一些药渣染色,好象我在检验过程中也遇到过几次,平板中的红点很显然不像菌落,却是红色的,再培养两天还是那般大小.如题,请问:TTC显色真的绝对可*么?被染成红色的就是菌落么? 有菌落生成就一定会被染成红色么?

:TTC能将菌落染成红色,但染成红色的不一定都是菌落。一般在未加TTC的营养琼脂培养基平板上加入0.001%TTC 5~10ml30min后菌落即染成深红色,可与其他有形物进行鉴别。

关键词:TTC显色



回复关于微笑同学问题1 问题由戴翚同学回答

问:单硬脂酸甘油酯(软膏基质)在微生物限度试验中一般如何前处理?

答:可以尝试用0.1%的蛋白胨缓冲液或者0.9%的盐水加吐温80配置成为1%的溶液,在45度溶解。

关键词:软膏基质 难溶





回复关于微笑同学问题2 问题由戴翚同学回答

问:不溶于水的高分子敷料如聚丙烯酸树脂4号在微生物限度试验中一般如何前处理?

答:可以尝试匀浆仪,另外先用CaCl2进行破乳,再于低速离心的条件下去上清液试验。

关键词:高分子 不溶于水





问:不溶于水的原辅料,微生物限度实验用药典的方法(即吐温80或十四烷酸异丙酯)都不溶的话,应该怎样考虑用别的什么溶剂来溶解比较好?可以推荐几种溶解方法吗?

答:不溶于水的原辅料的微生物限度实验按药典规定的方法(即吐温80或十四烷酸异丙酯)都不溶,也可考虑用液体石蜡聚山梨酯法、聚山梨酯西黄耆胶(或羧甲基纤维素钠)法来分散乳化制成混悬液(见马绪荣,等编.药品微生物检验手册.北京:科学出版社,2000)或研究其他的方法

关键词:不溶于水的原辅料





问:微生物限度方法学验证每个品种的每个菌种都需要分别由不同的三个人来完成三个批号的产品(即每人做一个批号的验证)吗?

答:

药典规定微生物限度方法学验证试验至少应进行3次独立的平行试验。可理解为3个人每人做1个不同批号产品的验证试验;也可理解为1个人做3个不同批号产品的验证试验或1个人将1个批号的产品进行3次验证试验。

3个不同批号产品的微生物限度检查试验是产品质量考察必须的,而方法验证是考察检查方法的稳定性或重现性、可行性。中药3个批号的产品质量(如抑菌活性)的差异可能是大的。如果3个人各做1个不同批号产品的验证试验其结果可能误差更大。1人用1个批号产品做3次验证试验,误差会小得多。

关键词:方法学 试验人





问:大肠埃希菌检验过程中,MUG阴性对照显荧光怎么办?可以通过阴性对照、样品、阳性对照的荧光强弱来判断结果阳性或阴性?阳性对照的菌液浓度如何控制?

答:大肠埃希菌检验过程中,MUG阴性对照应不显荧光或很微弱荧光。此时通过阴性对照、样品、阳性对照的荧光强弱来判断阳性或阴性结果:一是阴性对照、样品、阳性对照的荧光强弱有明显不同,方可判断阳性或阴性结果;如样品的荧光与阴性对照的荧光接近或稍强时,应将MUG + 样品培养液继续培养18~24h,观察荧光,或取样品培养液划线分离培养、鉴定后,判断阳性或阴性结果。

阳性对照菌菌液浓度的控制:有经验的专业技术人员只要对照菌、培养基质量、培养温度和时间、菌液和稀释液的量、逐级稀释的操作的条件一致,所得菌液稀释浓度应是稳定的。

关键词:大肠埃希菌 MUG
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