主题：【讨论】求比较热电的Q-exactive和AB的5500Qtrap

原文由 nosomking(nosomking) 发表:
应该是配置Nano LC吧，而且是2-D的
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原文由 pingwang00(pingwang00) 发表:
现在出了6500 QTRAP，终于可以不再纠结m/z 范围，50-2000 做 bottom-up 的蛋白质组定量分析 够用了。

那么这个系统的分辨率就要依靠HPLC 部分来提高。请教 UPLC，nano HPLC, micro HPLC, 哪个更配QTRAP 蛋白质组定量分析？

能详细说明一下吗？谢谢分享

原文由 木有才(xgy2005) 发表:

原文由 pingwang00(pingwang00) 发表:
现在出了6500 QTRAP，终于可以不再纠结m/z 范围，50-2000 做 bottom-up 的蛋白质组定量分析 够用了。

那么这个系统的分辨率就要依靠HPLC 部分来提高。请教 UPLC，nano HPLC, micro HPLC, 哪个更配QTRAP 蛋白质组定量分析？

分辨率依靠HPLC来提高？这个，只听说过色谱分离度，木听说过分辨率，是一个概念吗？

的确，两者的计算方法不一样。
英语文献都用 resolution 来表示的。我就以为中文也用同一个词了。

蛋白质组学的前端分析技术，有：1）双相凝胶电泳，第一相是等电聚焦，第二相识SDS-PAGE，这是经典技术，对于推动蛋白质组学的发展起到了很大的作用，但是仍有许多不足，比如不能质谱在线联机分析，跑胶之后需要较多人工处理，然后再上质谱（如MALDI-TOF）分析。比如对于疏水性蛋白，难溶于缓冲液。低丰度蛋白。还有就重复性等问题需要重视。但是不管怎么样，该分离技术仍旧扮演重要角色；2）与质谱联用的LC技术。由于近10年，LCMS/MS技术有了飞速发展，相对应的LC技术也发展很快。比较重要的有UHPLC和NanoLC技术。但是就蛋白质组学来讲，与QTRAP联用的LC，如果经费允许，采用2-D NanoLC可以使目标物获得更好的分离，特别是蛋白质组学这样复杂的体系，在加上样品量少，现在质谱仪器灵敏度高，采用2-D NanoLC可以获得海量数据信息！2-D(二维）分析，第一维和第二维采用不同的技术，如不同色谱柱，这样可以对极为复杂样品进行很好的分离，同时质谱仪采集全部信息。理论上可以上升到三维等多维LC。对于NanoLC技术，目前QTRAP技术拥有者AB SCIEX公司，收购了Eksigent公司，Eksigent公司在NanoLC领域有独到领先的技术，可以上该公司网址去了解，Thermo、bruker也时常配置Eksigent的NanoLC，不过现在被AB SCIEX收购了。所以如果做蛋白质组学，AB SCIEX公司肯定会配置Eksigent公司NonaLC，并结合其iTraq试剂。多维NanoLC有很多优点，目前也是LCMS/MS用于蛋白质组学的标准配置。不过也有其缺点：分析时间长(没办法，流速到纳升级别）；相对于普通LC来讲，NanoLC对于使用人员要求比较高；价格比较昂贵。技术发展日新月异，如有不对，请指正。
      总之，做life science，就是烧钱！

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原文由 木有才(xgy2005) 发表:

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应该是配置Nano LC吧，而且是2-D的
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原文由 pingwang00(pingwang00) 发表:
现在出了6500 QTRAP，终于可以不再纠结m/z 范围，50-2000 做 bottom-up 的蛋白质组定量分析 够用了。

那么这个系统的分辨率就要依靠HPLC 部分来提高。请教 UPLC，nano HPLC, micro HPLC, 哪个更配QTRAP 蛋白质组定量分析？

能详细说明一下吗？谢谢分享

原文由 pingwang00(pingwang00) 发表:

原文由 木有才(xgy2005) 发表:

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现在出了6500 QTRAP，终于可以不再纠结m/z 范围，50-2000 做 bottom-up 的蛋白质组定量分析 够用了。

那么这个系统的分辨率就要依靠HPLC 部分来提高。请教 UPLC，nano HPLC, micro HPLC, 哪个更配QTRAP 蛋白质组定量分析？

分辨率依靠HPLC来提高？这个，只听说过色谱分离度，木听说过分辨率，是一个概念吗？

的确，两者的计算方法不一样。
英语文献都用 resolution 来表示的。我就以为中文也用同一个词了。

酱紫啊再一次提现了中文的博大精深啊

原文由 nosomking(nosomking) 发表:
蛋白质组学的前端分析技术，有：1）双相凝胶电泳，第一相是等电聚焦，第二相识SDS-PAGE，这是经典技术，对于推动蛋白质组学的发展起到了很大的作用，但是仍有许多不足，比如不能质谱在线联机分析，跑胶之后需要较多人工处理，然后再上质谱（如MALDI-TOF）分析。比如对于疏水性蛋白，难溶于缓冲液。低丰度蛋白。还有就重复性等问题需要重视。但是不管怎么样，该分离技术仍旧扮演重要角色；2）与质谱联用的LC技术。由于近10年，LCMS/MS技术有了飞速发展，相对应的LC技术也发展很快。比较重要的有UHPLC和NanoLC技术。但是就蛋白质组学来讲，与QTRAP联用的LC，如果经费允许，采用2-D NanoLC可以使目标物获得更好的分离，特别是蛋白质组学这样复杂的体系，在加上样品量少，现在质谱仪器灵敏度高，采用2-D NanoLC可以获得海量数据信息！2-D(二维）分析，第一维和第二维采用不同的技术，如不同色谱柱，这样可以对极为复杂样品进行很好的分离，同时质谱仪采集全部信息。理论上可以上升到三维等多维LC。对于NanoLC技术，目前QTRAP技术拥有者AB SCIEX公司，收购了Eksigent公司，Eksigent公司在NanoLC领域有独到领先的技术，可以上该公司网址去了解，Thermo、bruker也时常配置Eksigent的NanoLC，不过现在被AB SCIEX收购了。所以如果做蛋白质组学，AB SCIEX公司肯定会配置Eksigent公司NonaLC，并结合其iTraq试剂。多维NanoLC有很多优点，目前也是LCMS/MS用于蛋白质组学的标准配置。不过也有其缺点：分析时间长(没办法，流速到纳升级别）；相对于普通LC来讲，NanoLC对于使用人员要求比较高；价格比较昂贵。技术发展日新月异，如有不对，请指正。
      总之，做life science，就是烧钱！

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原文由 木有才(xgy2005) 发表:

原文由 nosomking(nosomking) 发表:
应该是配置Nano LC吧，而且是2-D的
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现在出了6500 QTRAP，终于可以不再纠结m/z 范围，50-2000 做 bottom-up 的蛋白质组定量分析 够用了。

那么这个系统的分辨率就要依靠HPLC 部分来提高。请教 UPLC，nano HPLC, micro HPLC, 哪个更配QTRAP 蛋白质组定量分析？

能详细说明一下吗？谢谢分享

多谢您的详细解释！
AB SCIEX 的销售建议用Nano，但DEMO 的技术人员建议用micro，最后我给了做micro的量去做测试， 25 ug 蛋白质的水解物/针，还在等结果呢。

原文由 nosomking(nosomking) 发表:
蛋白质组学的前端分析技术，有：1）双相凝胶电泳，第一相是等电聚焦，第二相识SDS-PAGE，这是经典技术，对于推动蛋白质组学的发展起到了很大的作用，但是仍有许多不足，比如不能质谱在线联机分析，跑胶之后需要较多人工处理，然后再上质谱（如MALDI-TOF）分析。比如对于疏水性蛋白，难溶于缓冲液。低丰度蛋白。还有就重复性等问题需要重视。但是不管怎么样，该分离技术仍旧扮演重要角色；2）与质谱联用的LC技术。由于近10年，LCMS/MS技术有了飞速发展，相对应的LC技术也发展很快。比较重要的有UHPLC和NanoLC技术。但是就蛋白质组学来讲，与QTRAP联用的LC，如果经费允许，采用2-D NanoLC可以使目标物获得更好的分离，特别是蛋白质组学这样复杂的体系，在加上样品量少，现在质谱仪器灵敏度高，采用2-D NanoLC可以获得海量数据信息！2-D(二维）分析，第一维和第二维采用不同的技术，如不同色谱柱，这样可以对极为复杂样品进行很好的分离，同时质谱仪采集全部信息。理论上可以上升到三维等多维LC。对于NanoLC技术，目前QTRAP技术拥有者AB SCIEX公司，收购了Eksigent公司，Eksigent公司在NanoLC领域有独到领先的技术，可以上该公司网址去了解，Thermo、bruker也时常配置Eksigent的NanoLC，不过现在被AB SCIEX收购了。所以如果做蛋白质组学，AB SCIEX公司肯定会配置Eksigent公司NonaLC，并结合其iTraq试剂。多维NanoLC有很多优点，目前也是LCMS/MS用于蛋白质组学的标准配置。不过也有其缺点：分析时间长(没办法，流速到纳升级别）；相对于普通LC来讲，NanoLC对于使用人员要求比较高；价格比较昂贵。技术发展日新月异，如有不对，请指正。
      总之，做life science，就是烧钱！

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原文由 木有才(xgy2005) 发表:

原文由 nosomking(nosomking) 发表:
应该是配置Nano LC吧，而且是2-D的
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原文由 pingwang00(pingwang00) 发表:
现在出了6500 QTRAP，终于可以不再纠结m/z 范围，50-2000 做 bottom-up 的蛋白质组定量分析 够用了。

那么这个系统的分辨率就要依靠HPLC 部分来提高。请教 UPLC，nano HPLC, micro HPLC, 哪个更配QTRAP 蛋白质组定量分析？

能详细说明一下吗？谢谢分享

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晕，由于近10年，LCMS/MS技术有了飞速发展，相对应的LC技术也发展很快。比较重要的有UHPLC和NanoLC技术----------UPHLC比Waters的UPLC重要？简直无语了

楼上+1
顺便说一下，UPLC也有nano级别的，叫nano UPLC。

原文由 vivian925(vivian925) 发表:
楼上+1
顺便说一下，UPLC也有nano级别的，叫nano UPLC。

请问vivian老师，UPLC跟nano UPLC在性能上的差异主要体现在哪方面？

原文由 happy爱米粒(xgy2005) 发表:

原文由 pingwang00(pingwang00) 发表:
现在出了6500 QTRAP，终于可以不再纠结m/z 范围，50-2000 做 bottom-up 的蛋白质组定量分析 够用了。

那么这个系统的分辨率就要依靠HPLC 部分来提高。请教 UPLC，nano HPLC, micro HPLC, 哪个更配QTRAP 蛋白质组定量分析？

分辨率依靠HPLC来提高？这个，只听说过色谱分离度，木听说过分辨率，是一个概念吗？

不是一个概念，但是Q-E如果想做高分辨的话一定不能联接快速液相，时间来不及，特别是多化合物监测的时候。
这一定可以从Q-E的官方指标可见端倪，也就是做不同扫描速率的情况下分辨率是很不一样的，
根据扫描速率不同有不同指标，如果记得没错的话最高140000FWHM，最低是17500FWHM，
当然无论哪个分辨率都会比QTRAP来的高，如果是和QTRAP比较，肯定是Q-E啦。
如果是和QTOF比，那就另说了。

强烈顶19楼，楼主nanospray真是个明白人，说的非常准确，把Q-E一针见血，大家其实简单想想，以前说TOF不能定量是因为线性范围不够，经过技术的发展，现在QTOF都在4-5个数量级范围，但吹的神乎其神的Q-E英文指标成为5000，这就是号称又能定量又定性的表现？？我觉得Q-E其实就是热电想抢Q-TOF市场推出来炒Orbi概念的一个产品，Q-E可比Trap-orbi差远喽！！！个人觉得，Q-E非真正的orbi!!