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液相色谱（LC）

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主题：【求助】HPLC指纹图谱一定要用质谱吗？

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yjm368

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发表于：2012/08/29 15:43:05 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

悬赏金额：20积分状态：已解决

我想建立一植物的HPLC的指纹图谱，看了药物方面的很多都是用的高效液相-质谱出的图谱。我单位只有Agilent 1200。不知道光利用HPLC能否建立指纹图谱？如果光用HPLC是不是一定要有标准液，做指纹图谱的标准液该如何选？
请高人指点？拜谢。

推荐答案：dark_wzy回复于2012/09/02

中药指纹图谱最早是用液相来做的，发展到后来才把质谱引入进来。所以，不是液相不能做指纹图谱，而是看楼主做指纹图谱的目的是什么？如果只是为了做不同药物之间的相似性，可以用紫外等检测器，如果需要对其中的某些成分进行定性，则需要用到质谱了。

补充答案：

有水有渝回复于2012/08/29

你参考一下中药指纹图谱的建立，不一定都需要质谱。

liboygg回复于2012/08/30

这得看手头有什么设备，以及你的项目是否一定要做质谱的。光用HPLC是可以的，指纹图谱首先当然是各个峰分离度较好比较重要，对于不好分离的可以作为一个特征区域代笔一个特征。

三人行回复于2012/11/12

该帖子作者被版主 zhaohua8011加 2积分， 2经验，加分理由：鼓励新人

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2012/8/29 15:44:10 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

本人QQ：465210080.24小时恭候佳音。。。。拜谢啊

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有水有渝

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2012/8/29 15:48:16 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

你参考一下中药指纹图谱的建立，不一定都需要质谱。

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2012/8/29 15:59:41 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
你参考一下中药指纹图谱的建立，不一定都需要质谱。

对啊，我就是想如果单独依靠HPLC来完成的话一定要标样，标样的选择也是很有讲究的。

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guitu

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2012/8/29 17:10:31 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

只用HPLC的话那你要保证能将样品分离出来，我看一条柱子有点困难

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2012/8/30 13:24:34 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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2012/8/30 16:22:43 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 guitu(guitu) 发表:
只用HPLC的话那你要保证能将样品分离出来，我看一条柱子有点困难

嗯，柱子要选好几个的。

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2012/8/30 16:29:53 7楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 liboygg(liboygg) 发表:
这得看手头有什么设备，以及你的项目是否一定要做质谱的。光用HPLC是可以的，指纹图谱首先当然是各个峰分离度较好比较重要，对于不好分离的可以作为一个特征区域代笔一个特征。

现在实验室只有安捷伦1200的液相和紫外检测器。
我只要做出指纹图谱，不一定要质谱。下面是我想要做的样品制备，请帮我指点一下啊。

样品制备：

将新鲜浒苔样品用蒸馏水冲洗干净，至于烘箱中55℃干燥24h。干燥后的浒苔样品切断粉碎、过40目筛后混合均匀，制备成浒苔粉末样品。

准确称取0.5g浒苔粉末样品，置于100 ml具塞锥形瓶中，加入50ml正丁醇、乙醇混合液（V：V=9:1）,在室温条件下超声提取60min，静置30min，过滤，取上清液于100ml旋蒸瓶中，在80℃条件下旋转蒸发至干，用乙腈溶解提取物并定容至2ml，过0.45μm微孔滤膜后作为供试品溶液。

流动相：水（A），乙腈（B）。

梯度洗脱

如何选流动相？或者1%磷酸水（A），乙腈（B）（？）

在做高效液相分析时,用流动相溶解样品是不是能适当地消除溶剂峰？

流速、检测波长、进样量、梯度洗脱程序、流动相比例等是如何确定的？

再有就是，单独用HPLC建立指纹图谱的时候是不是要选择好对照品，该如何选？是不是比如我要测定脂肪酸，那就选脂肪酸？

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