原文由 shengkai2009(shengkai2009) 发表:
还有,紫外是浓度型的检测器,这个是众所周知,那为什么同一浓度的样品进样量增加,响应也会增加?
紫外检测器是浓度型的没错。
如果你不接色谱柱(用两通代替色谱柱),在恒定流速的条件下,在进样量足以忽略流动相的稀释效应的前提下,做改变进样量的实验,你会发现:增加进样量并不会增加紫外吸收信号的高度,只是增加信号的宽度。
一旦接上色谱柱,情况就不一样了。由于样品在色谱柱上的保留以及在固定相和流动相之间的分配,样品在随流动相离开色谱柱的时候,是以一个流出曲线按照时间顺序以不同的浓度离开的。具体情况请参阅色谱书籍。
在理论塔板数相同的条件下,相同浓度的样品增加进样量也好,相同的进样量增加浓度也好,结果都是增加了进入色谱柱的样品的绝对量。只要色谱柱没有超载,紫外检测器没有饱和,用紫外检测器记录的色谱峰的信号(峰高、峰面积)是随绝对的进样量增加而增加的。
这样看来,我们做标准曲线,似乎很简单,不再需要配置一系列不同浓度的标样了,只要一个浓度的标样,改变进样量就可以做出标准曲线。确实是这样,只要你保证进样体积足够准确。我也做过这样的实验,确实能做出标准曲线。那大家为什么还是很费事的配置一系列不同浓度的标样,然后用相同的进样量来做标准曲线呢?这个问题,只要是色谱用得久的,都知道为什么。这里说出来只是给你一个提醒,具体原因,或许你已经知道,暂且不论。