主题：【原创】高效液相色谱法测定有关物质的方法建立的过程

原文由 jncxyy2012(jncxyy2012) 发表:
色谱柱可以换成250*4.6mm,5um的试试。

原文由 jiaodandan(jiaodandan) 发表:

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色谱柱可以换成250*4.6mm,5um的试试。

换过了，用的是依利特的长柱子，分析时间大大增加了啊，对已分离极性比较靠近的物质你有没有从流动相上做文章的经验啊？
我试过三氟乙酸的，就离子对的还没试验过！

原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:

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色谱柱可以换成250*4.6mm,5um的试试。

换过了，用的是依利特的长柱子，分析时间大大增加了啊，对已分离极性比较靠近的物质你有没有从流动相上做文章的经验啊？
我试过三氟乙酸的，就离子对的还没试验过！

  三氟乙酸对改变分离度作用不大，调节流动相减少乙腈的比例应该是最有效的办法。pH值调节合理也会略微改善分离度。

原文由 jiaodandan(jiaodandan) 发表:
A相是20mM的磷酸二氢钠（PH3.0） B相是乙腈，流速1.0，柱温40，梯度如下
T    0    70  70.1    80
B    20  80  20      20
A相尝试过PH7.0与2.5的，柱温尝试过30度的
YMC  C18柱（150*6.0mm,5um）

原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:

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A相是20mM的磷酸二氢钠（PH3.0） B相是乙腈，流速1.0，柱温40，梯度如下
T    0    70  70.1    80
B    20  80  20      20
A相尝试过PH7.0与2.5的，柱温尝试过30度的
YMC  C18柱（150*6.0mm,5um）

不知道保留时间各为多少？只能大体说一下，看有没有用。可以把有机相换成甲醇和乙腈混合液，如果比例合适会对分离度有改善。比例需要在试验中摸索。

原文由 jiaodandan(jiaodandan) 发表:
所有峰均在30min左右，分离度最差的是1.6最好的有2.8的样子，总分析时间80min，我再试试，如果实在没办法将它们的分离度再扩大点的话也只能这样了！

原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:

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所有峰均在30min左右，分离度最差的是1.6最好的有2.8的样子，总分析时间80min，我再试试，如果实在没办法将它们的分离度再扩大点的话也只能这样了！

如果所有峰均在30min左右，可以用等度洗脱啊，乙腈比例大约在40%左右，如果有机相换成甲醇和乙腈，可以适当加大比例，你可以试一试，看结果如何。

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原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:

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所有峰均在30min左右，分离度最差的是1.6最好的有2.8的样子，总分析时间80min，我再试试，如果实在没办法将它们的分离度再扩大点的话也只能这样了！

如果所有峰均在30min左右，可以用等度洗脱啊，乙腈比例大约在40%左右，如果有机相换成甲醇和乙腈，可以适当加大比例，你可以试一试，看结果如何。

等度65:35的话其中有一个峰跟主峰并在一起了，只有梯度才能分开这个峰，也就是这个峰在梯度时跟主峰分离度最差，大概在1.6的样子！我准备将已经换成甲醇试下，然后再用甲醇跟乙腈的混合相再试！最大比例是缓冲盐与有机相为8:2,试过9:1两相的互溶性差了！

原文由 zhaohua8011(zhaohua8011) 发表:
有关物质方法建立的确比较麻烦