主题：【原创】婴幼儿配方奶粉中维生素D2、D3的检测解决方案

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迪马科技

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发表于：2013/01/16 16:59:04 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

婴幼儿配方奶粉中含有丰富的水溶性维生素，我国国家标准GB10767-1997对婴幼儿配方食品与奶粉中维生素含量有明确的规定，目前我国维生素检测主要依据的标准有GB/T5413-1997和GB/T5009-2003中相关标准，涉及的方法有微生物法、荧光分光光度法和高效液相色谱法。

迪马科技参考《GB 5413.9-2010 食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中维生素A、D、E的测定》，建立了配方奶粉中维生素D₂、D₃解决方案，无需两台液相完成实验，用VDC前处理净化柱代替硅胶色谱柱净化，具有前处理简单，回收率损失少，固相萃取柱净化效明显、方法重现性好等优点。

具体检测方法如下：

1 适用范围

该方案适用于婴幼儿配方奶粉中维生素D₂、D₃的检测。

2 样品准备

(1) 取2 g样品，加入5 mL水，充分混匀；

(2) 加入1 mL二甲基亚砜、5 mL甲醇和20 mL 正己烷：甲基叔丁基醚=1：1，涡旋混合2 min，6000rpm离心2 min，收集上清液；

(3) 向下层残渣中依次加入1 mL二甲基亚砜、5 mL甲醇和10 mL 正己烷：甲基叔丁基醚=1：1，重复提取两次，合并三次提取上清液；

(4) 将上清液在40 ℃下减压蒸至近干，待净化。

3 SPE柱净化——ProElut VDC 2 g/12 mL(Cat.#：65358)

(1)活化：	依次向柱中加入10 mL乙酸乙酯、10 mL正己烷，弃去流出液；
(2)上样：	再用5 mL正己烷分两次洗涤旋蒸瓶并加入柱中，弃去流出液；
(3)淋洗：	依次向柱中加入10 mL正己烷、10 mL10%乙酸乙酯正己烷，弃去流出液；
(4)洗脱：	向柱中加入20 mL 10%乙酸乙酯正己烷，收集流出液；
(5)重新溶解：	将洗脱液在40 ℃减压蒸至近干，用甲醇定容至1 mL，供HPLC分析。

4 分析条件

色谱柱：	Diamonsil C18(2)，250 mm×4.6 mm，5μm（Cat# 99603）
流速：	1.0mL/min
检测器：	UV 265 nm
柱温：	30℃
进样量：	20 μL
流动相：	甲醇

5添加回收结果

婴幼儿配方奶粉中维生素D₂、D₃（添加水平1.25 mg / kg）的添加回收结果

目标化合物	维生素D₂	维生素D₃
回收率(%)	106.45	98.24

婴幼儿配方奶粉中维生素D₂、D₃的检测相关产品信息

货号	名称	规格
样品前处理
65358	ProElut VDC 固相萃取柱	2 g/12 mL
244358	12管防交叉污染真空SPE萃取装置	12位
4803	1,3,6mL柱管通用连接器	15/pk
4806	考克(控制流量)	15/pk
99011	真空/正压两用泵，无油	1/pk
99013	抽滤瓶套装 (包括硅橡胶管2米,2L抽滤瓶及橡胶塞)	1/pk
1095	不锈钢点胶针头	50/PK
37177	针头式过滤器 Nylon	13 mm,0.22 μm 100/pk
37180	针头式过滤器 Nylon	13 mm,0.45 μm 100/pk
色谱柱及保护柱
99603	反相高效液相色谱柱 Diamonsil C18(2)	250 × 4.6mm, 5μm
6201	EasyGuard C18 保护柱	10 × 4.0mm 1/pk 2个柱芯+1个柱套
标准品
12-V-17	维生素D2[50-14-6]	100mg
12-V-18	维生素D3[67-97-0]	100mg
HPLC溶剂Ÿ缓冲盐Ÿ离子对试剂
50102	甲醇HPLC 级	4 L
50115	正己烷HPLC级	4 L
50123	甲基叔丁基醚HPLC级	4 L
50119	二甲基亚砜HPLC级	4 L
50104	乙酸乙酯HPLC级	4 L
通用色谱产品
52401B	瓶架/蓝色	50 孔
52401A	瓶架/白色	50孔
5323	样品瓶（棕色/螺纹）	2 mL, 100/pk
5325	样品瓶盖/含垫（已经组装）	100/pk
H80465	HPLC 进样针	25 μL