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主题：【讨论】为什么把凝胶柱倒过来压力就降下来了呢？

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发表于：2013/10/01 19:07:43 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
求各位高手，本人买了superdex 200的凝胶柱（预装柱），用安捷伦的HPLC来做凝胶过滤。一开始还正常，可有一次用甲醇清洗时发现里面的胶呈干粉状（疑为脱水），恢复后发现柱压变大，超过了该柱的最大耐受压力（15bar，在同样的流速下）（确定是柱子的原因）。后来用酸、碱冲洗压力下降了一些，但用4M尿素作为流动相时，压力（同样流速）缓缓升高，没到平衡就超压，样都没法上了。于是把柱子倒过来洗脱，这时压力下降，可以上样了。我的问题是：为什么把柱子倒过来压力就降下来了呢？
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2013/10/9 14:03:10 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
柱子倒过来装，压力下降了，有可能柱前有污染，反冲将污染物洗脱了，那你再正装来正常吗？
你的盐浓度太高，蛋白质容易吸附和变质。使用时更要小心。
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2013/10/26 17:21:06 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 小不董(doxw0323) 发表:
柱子倒过来装，压力下降了，有可能柱前有污染，反冲将污染物洗脱了，那你再正装来正常吗？

你的盐浓度太高，蛋白质容易吸附和变质。使用时更要小心。


谢谢帮助，目前柱压正常了。问题出在样品上，后来用酸碱及蛋白酶交替冲洗，压力回复了正常。
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