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在
气相色谱中,为了改善对宽沸程样品的分离和缩短分析周期,广泛采用程序升温的方 法。而在
液相色谱中对组分复杂的样品则采用梯度洗脱的方法。在同一个分析周期中,按一定程序不断改变流动相的浓度配比,称为梯度洗脱。从而可以使一个复杂 样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。
程序升温,是色谱柱的温度按设置的程序连续地随时间线性或非线性逐渐升高,以使低沸点组分和高沸点组分在色谱柱中都有适宜的保留、色谱峰分布均匀且峰形对称。程序升温可以多阶。
程序升温示意图
梯度洗脱,是通过改变通过色谱柱的流动相,让流动相连续的随时间线性或非线性的变化。梯度洗脱主要用于被分离组分复杂,且正常方法洗脱时间过长的情况,梯度洗脱可以显著缩短分析时间,并且比一般方法分离得到的峰个数多,分离度更好,一个方法,梯度可以变化多次。
梯度示意图(A、B表示流动相比例)
色谱分析,面对复杂的混合物,要让多组分分离,通常在GC色谱分析中,会采用程序升温;同样在HPLC中,就采用梯度洗脱,让复杂组分得到分离。如图,比较可以看出,用恒温分析和程序升温分析有很大的区别。
梯度洗脱也可以把等度分不开的色谱峰,通过改变流动相比例来调整分离度。程序升温
气相色谱都可以实现,而梯度洗脱,高压泵
液相则需要2个泵来走不同的流动相改变比例,低压泵则可以通过比例阀来改变流动相组成。
随着分析的物质越来越复杂,程序升温和梯度洗脱应用越来越多,把这两个方法运用得当,都可以获得理想的色谱峰。