主题：【讨论】液相中不同的溶剂会导致出峰的分叉？？

楼主可以百度一下“溶剂效应”。

是因为乙腈对甲基异噻唑啉酮溶解能力过强的缘故。

普通液相上溶剂效应也这么强吗？

在进行HPLC分析时，由于各种原因，有时候明明是一个单体化合物，却在液相色谱图中表现出两个峰（一大峰带一小峰或两峰峰高、面积差不多）。出现这种情况，大概有以下几种原因：
1、色谱柱的问题
如果分析样品时发现每个色谱峰都出双峰（出峰越早，双峰的可能性会减少），尤其是分析纯单体化合物也表现出双峰时，可以肯定色谱柱出问题了（柱头堵了、脏了或柱头塌陷、固定相流失）。这种情况更换色谱柱即可解决问题，也可对色谱柱进行处理、冲洗等，但效果不好且费时。
2、溶剂极性及进样量的问题
目前HPLC分析多为反相色谱，流动相多为甲醇、乙腈、水，加各种添加剂以改善分离性能和峰形。样品一般用与流动相相溶的溶剂溶解，最好用流动相溶解。但很多情况下，样品不能用上述溶剂溶解。当用溶剂极性强度大的试剂，如纯甲醇、纯乙腈、纯乙醇，而分析体系中以水为主，样品进样量大（如20微升），此条件下单一物质完全可能出双峰（一大峰带一小峰或两峰峰高、面积差不多）。
如本人分析一样品：样品用纯EA溶解，流动相为0.05%TFA in Water and 0.05%TFA in ACN梯度洗脱，进样量为5微升，结果纯物质出两个峰（3.2左右出一矮胖峰，3.4左右出一尖峰），将进样量改为3还是一样，但把进样量改成1就只出一个峰。
这种情况是因为溶解样品的溶剂与流动相的极性相差太大，流动相还来不及将其稀释达到平衡造成的，此时，减少进样量可解决问题。
另外，有时候进样量不一定大，但绝对量很大时（即样品浓度很大），也可能会表现出双峰。这是因为进样量（样品的绝对量）过大，色谱柱超载造成的，稀释样品即可解决问题。
所以，当溶解样品的溶剂与流动相极性相差较大或溶解样品的溶剂与流动相需要较长时间达到平衡时，最好将样品配稀一点、进样量少一点，否则，可能会出现纯物质出双峰的情况。
3、样品本身的问题
有些样品由于其化学结构的特点，存在互变异构现象，而这种互变异构体无法分开，而是以一个动态平衡存在，这也可能导致双峰的出现。有的样品在紫外色谱图上看不到双峰，但在LC-MS下，其质谱的TIC（总离子流图）图上较明显。

置换 效应。

典型的溶剂效应。