主题：【第七届原创】QuEChERS-柱后衍生高效液相色谱法测定食品中10种氨基甲酸酯类农药残留

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发表于：2014/08/27 14:18:21 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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QuEChERS-柱后衍生高效液相色谱法测定食品中10种氨基甲酸酯类农药残留

农残检测

摘要：建立了一种QuEChERS-柱后衍生高效液相色谱荧光法同时测定食品中10种氨基甲酸酯类农药残留。采用Elite ACO氨基甲酸酯专用分析柱 (5μm，4.6mm×250mm)，以甲醇和水溶液为流动相进行梯度洗脱，10氨基甲酸酯类农药均能达到基线分离并有良好的峰型，在0.05～10.0mg/L浓度范围内线性相关系数可达0.9999，方法检出限在0.005～0.012mg/kg之间，回收率在75.20%～100.37%之间，相对标准偏差在0.32%~8.90%之间。样品前处理方法操作简便，省时省力且成本低，易于推广，分析方法定量结果准确，为食品中氨基甲酸酯类农药的分析提供可靠依据。

农药残留是食品中常见的主要化学污染物质之一，给人们的健康带来安全隐患，严重时甚至危及生命。农药中以杀虫剂对食品的污染最为严重，而氨基甲酸酯类农药杀虫剂以其作用迅速、选择性高，有些品种还具有强内吸性以及低残留毒性等优点，被广泛使用，其同时也是引发农药急性中毒的主要来源，因此对此类农药和其副产物的分析检测，具有重要意义。

样品前处理是农药残留分析的核心，目前农药残留前处理方法有固相萃取法、超临界流体萃取法、基质固相萃取法、液液分配提取法等。在农药残留检测中，传统的固相萃取柱会降低某些极性较高农药的回收率，同时操作时间长，成本高。相比之下QuEChERS方法能提供较高的回收率，而且操作更快、更简单、成本更低，易于推广。本文采用QuEChERS方法进行样品前处理，邻苯二甲醛(OPA)柱后衍生-荧光法进行检测，建立了一种前处理简便、分析时间短、实验结果重复、准确的分析方法，为食品中氨基甲酸酯类农药的分析提供可靠依据。

1.实验部分

1.1仪器与试剂

1.1.1P1201高效液相色谱仪(包括P1201高压恒流泵4台，Rheodyne7725i型手动进样阀、ZWⅡ型色谱柱恒温箱)，EC2006色谱数据处理工作站，A/D适配器(以上均为大连依利特分析仪器有限公司产品)，PCD3020柱后衍生反应器(技嘉科技有限公司)，RF-20AXs荧光检测器(岛津公司)，离心机(SIGMA)，涡旋混合器（江苏海门麒麟医用仪器厂），氮吹仪（天津恒奥科技有限公司），超声波清洗器（天津奥特赛恩斯仪器有限公司），多功能食品处理器（顺德高达莱日用电器有限公司），Milli-Q纯水器（默克密理博公司）等。

1.1.2甲醇(色谱纯)，乙腈(色谱纯)，氢氧化钠，邻苯二甲醛(化学纯)，β-巯基乙醇，四硼酸钠(硼砂)，MgSO₄，NaCl(除特别标注外，其它均为分析纯)，PSA（伯胺/仲胺），超纯水；苹果样品(市售)；涕灭威亚砜(纯度99%)，涕灭威砜(纯度99.2%)，速灭威(纯度98%)，甲萘威(纯度99%)，异丙威(纯度98.5%)，仲丁威(纯度97.7%)，3-羟基克百威(纯度99%)，灭多威(纯度98%)，克百威(纯度99%)，涕灭威(纯度99%)。

1.2标准溶液、试剂配制方法

1.2.1标准溶液配制：配制浓度为100 mg/L的10种氨基甲酸酯类农药混合标准溶液，再用甲醇逐级稀释至0.05 mg/L，0.1 mg/L，1.0 mg/L，5.0 mg/L，10.0 mg/L，得到系列标准工作液。

1.2.2水解液：0.05 mol/L氢氧化钠水溶液；

1.2.3衍生液：邻苯二甲醛溶液(取4.775 g四硼酸钠溶于约200 mL水中，另称取25 mg邻苯二甲醛溶于2.5 mL甲醇中，缓慢将邻苯二甲醛溶液滴加到四硼酸钠溶液中，边加边摇动。加100 μL β-巯基乙醇于混合液中，摇匀后用水稀释到250 mL，使四硼酸钠溶液浓度为0.05 mol/L(衍生液放置在棕色溶剂瓶中使用)。

1.3前处理方法

1.3.1样品取样：苹果样品不水洗，先用水果刀预切成约1 cm×1 cm大小的块状，再将其置于多功能食品处理器中打成细小碎块，混合均匀后称取10.0 g样品置于50 mL离心管中，备用；

1.3.2样品提取/分离：向上述样品中加入15 mL乙腈，涡旋混合1 min，使用定量滤纸过滤，再向滤液中加入4g MgSO4/1g NaCl，立刻涡旋混合1 min ，4000 rpm/min离心5 min；

1.3.3样品萃取/浓缩：取上述上清液6 mL置于10 mL离心管中，并向其中加入900 mg MgSO4/300mg PSA，立刻涡旋混合1 min，4000 rpm/min离心5 min；取上清液3 mL，40℃氮气吹至近干，残渣使用1 mL甲醇溶解，过滤，上样分析。

1.4实验条件

色谱柱：Elite ACO氨基甲酸酯类农药专用分析柱(5μm，4.6mm×250mm)；流动相A为甲醇，流动相B为水；梯度洗脱程序：0~9min，15~50%A；9~16 min，50~90%A；16~19 min，90~90%A；流量为1.0 mL/min；柱温为42 ℃；进样量为10 μL；激发波长330 nm，发射波长465 nm^[6]；水解反应室温度：100 ℃；水解输液泵流速：0.6 mL/min；衍生反应室温度：60 ℃；衍生输液泵流速：0.2mL/min；

2.结果

2.1典型分离谱图

图1 10种氨基甲酸酯类农药标准品分离色谱图

(1. 涕灭威亚砜； 2. 涕灭威砜； 3. 灭多威；4. 3-羟基克百威； 5. 涕灭威； 6. 速灭威； 7. 克百威； 8. 甲萘威； 9. 异丙威； 10. 仲丁威 )

2.2线性相关性及检出限

标准溶液浓度分别为0.05mg/L，0.1mg/L，1.0mg/L，5.0mg/L，10.0mg/L。10种氨基甲酸酯类农药标准品浓度-峰面积线性曲线、线性相关系数见表1。结果说明10种氨基甲酸酯类农药在上述浓度范围内具有良好的线性相关性。

表1 线性相关性及检出限列表

峰号	名称	线性曲线	线性相关系数R	方法检出限mg/kg
1	涕灭威亚砜	y=104.07x-4.6139	0.9999	0.008
2	涕灭威砜	y=106.47x-4.5611	0.9999	0.007
3	灭多威	y=140.42x-5.1506	0.9999	0.005
4	3-羟基克百威	y=70.005x-2.9517	0.9999	0.010
5	涕灭威	y=105.33x-4.2844	0.9999	0.006
6	速灭威	y=84.315x-3.3494	0.9999	0.008
7	克百威	y=57.280x-2.8600	0.9999	0.012
8	甲萘威	y=122.17x-3.9678	0.9999	0.005
9	异丙威	y=68.789x-2.7711	0.9999	0.009
10	仲丁威	y=61.055x-3.1133	0.9999	0.011

2.3方法准确性

阴性苹果样品，加标量分别为0.4μg、2.0μg，每个加标浓度点平行处理3次，取平均值计算加标回收率，结果见表2。

表2 加标回收率结果

加标量0.4μg		加标量2.0μg
峰号	名称	回收率%	RSD值%	回收率%	RSD值%
1	涕灭威亚砜	91.45	2.00	87.60	0.32
2	涕灭威砜	96.80	4.35	92.33	0.97
3	灭多威	95.22	2.62	86.89	5.05
4	3-羟基克百威	97.35	3.80	92.45	1.00
5	涕灭威	93.70	3.26	84.57	2.14
6	速灭威	84.15	8.90	75.20	5.85
7	克百威	100.37	1.75	89.10	2.90
8	甲萘威	100.00	2.45	93.65	1.05
9	异丙威	90.26	2.95	80.90	3.15
10	仲丁威	95.90	3.10	85.75	3.89

2.4实际样品分析

图2 苹果样品分析谱图

采购市售苹果样品进行分析，检测结果表明，实际样品中无杂质干扰，所分析的10种氨基甲酸酯类农药均未检出。

3.结论

实验表明本分析方法重复性好，结果准确。10种氨基甲酸酯类农药标准品在0.05～10.0mg/mL范围内具有良好的线性相关性，线性相关系数均为0.9999；加标回收率在75.20%～100.37%之间，相对标准偏差在0.32%~8.90%范围之内；方法检出限在0.005～0.012mg/kg之间；该方法前处理简便易行、分析时间短、分离效果佳，为食品中氨基甲酸酯类农药检测提供可靠的依据。

参考文献：

[1]秀尧，蔡欣欣.[J].中国卫生检验杂志.2008,18,(3):396-398

[2]于文莲，王超，储小刚.[J].色谱.1998,16(5):430-432

[3]张帆，李忠海，王利兵，黄志强，张莹，王美玲.[J].中国食物与营养.2010(02):64-67

[4]于彦彬，谭丕功，曲璐璐，王学松.[J].分析试验室,2009,11(28):98-101

[5]孙磊，金红宇，田金改，林瑞超.[J].药物分析杂志,2010,30(4):668-672

[6]NYT761-2008 ..蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定.

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