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主题：【讨论】利用CNW Athena C18-WP 色谱柱进行婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定

浏览0 回复5 电梯直达
紫叶阳光7
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发表于：2014/09/30 09:12:08 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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参照《婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定——征求意见稿》，对婴幼儿乳粉中的核苷酸含量进行测定。

操作步骤：

1、前处理：依据意见稿，利用10%的乙酸进行蛋白质沉淀，待测，上机。或者利用1+1盐酸调PH1.7，再用2.5mol/L NaOH调4.5 ，过滤，待测；

2、测定：

流动相：磷酸盐缓冲液（1.36gKH2PO4+0.4753g四丁基硫酸氢铵定容至1000ml，用0.1mol/LK2HPO4调PH至3.3.（这个PH值一定要调准，否则AMP及UMP比较难分开））：甲醇=1000:40；

色谱柱：CNW  Athena C18-WP  100A  4.6*250mm ，5um

流速、波长、柱温及进样体积与意见稿一致

在此次试验过程中，得出测定核苷酸过程中，流动相的PH值调节准确与否5个峰是否完全分开有很大关系，另外甲醇的比例可以进行微调1%，另外考虑到柱子寿命，一定要选耐水性柱子，以免对柱子造成破坏。



图1为PH值调节不那么精确时，标液的出峰情况，2、3个峰没有完全分离；



图2:  流动相PH准确调为3.3，标样的峰已完全分开。

结论：测定核苷酸过程中，需注意以下几点：

1、选择具有一定耐水性能的C18柱；2、流动相PH准确调节为3.30 ；3、若以上2点均已达到，峰还不能完全分离，建议适当微调流动相中甲醇含量；

      以上为本人初次实验时发现的初级经验，有不合理之处请各位高手指正、指教。
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vcningmeng
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2014/9/30 9:38:31 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
分离的不错，如果有对比和比较那就更好了。
96%的水的比例的确有些高。
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千层峰
jxyan
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2014/9/30 10:30:05 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
调pH值，是用pH计来测么？？
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hyf020115212
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2014/10/1 9:46:09 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这只是测样品中游离的核苷酸吧？若要测总的核苷酸含量（即游离的和样品中结合的核苷酸）是不是要酶解，楼主有做过吗？
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9999youran
v2889188
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2014/10/18 14:17:05 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
很好，学习了！
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冰火女孩
xuwanxiu2006
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2014/10/29 9:02:00 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
图2分离的很好。
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