高效的色谱柱快速的中药检测
今天我们介绍中药材马钱子及马钱子高效液相色谱法检测。
马钱子为马钱科植物马钱的种子。马钱是一种常绿乔木植物,多生于山地、林中,在东南沿海各省均有人工栽培。
马钱子药物成分主要有士的宁(strychnine,又名番木鳖碱)、马钱子碱(brucine)、番木鳖次碱(vomicine)、马钱子新碱(novacine)、番木鳖甙(loganin)等。
马钱子性寒,微有香气,味极苦,毒性大,入药具有止痛、消肿、消炎抗菌、活血通络、除风祛湿、祛瘀生肌、抗癌等药物功效。可用于治疗风湿顽痹、麻木瘫痪、跌扑损伤、痈疽疮毒、骨折肿痛、痈疽肿痛。由于该物具有很大毒性,不宜多服久服及生用,运动员慎用,孕妇禁用,最好按医师叮嘱服用。
下面我们就进入中药材马钱子快速检测高效液相色谱法介绍。
实验部分
检测原理
准确称取该药材适量,溶解、水浴回流提取后有进样器进入高效液相色谱系统,经C18色谱柱分离,紫外检测器检测,保留时间定性,峰面积定量(外标法)计算。
仪器及试剂
仪器:高效液相色谱仪(紫外检测器+等度泵+柱温箱+C18色谱柱+进样器+色谱工作站),超声波清洗仪,溶剂过滤器,具塞锥形瓶,三号筛(药典筛),电子天平,水浴回流装置,滤纸过滤装置等。
试剂:甲醇(色谱纯),乙腈(色谱纯),氢氧化钠(分析纯),三氯甲烷(分析纯),超纯水等。
样品制备
对照品溶液制备:精密称取士的宁对照品6mg、马钱子碱对照品5mg,分别置于50ml容量瓶中,加三氯甲烷10ml使溶解,用甲醇稀释至刻度,摇匀,分别制得0.12mg/ml士的宁、0.1mg/ml马钱子碱对照品溶液,备用。
供试品溶液制备:取马钱子药材适量,充分粉碎后过三号筛(药典筛),精密称取过筛粉末0.6g置于具塞锥形瓶中,加氢氧化钠试液3ml,摇匀,静置30分钟,精密加入三氯甲烷20ml,密塞,称定重量,水浴中回流提取2小时,放冷,再次称定重量,用三氯甲烷补足减少的重量,摇匀,取适量三氯甲烷液,滤纸滤过,精密量取续滤液3ml,置于l0ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,0.45um微膜滤过,待测。
色谱条件
检测器:紫外检测器
色谱柱:Venusil XBP C18(4.6X250mm,5ul)
V9520525CK0043
流动相:乙腈:0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L的磷酸二氢钾等量混合(用10%磷酸调节pH值2.8)=21:79(V:V)
检测波长:260 nm
流速:1.0 mL/min
柱温:30℃
进样量:l0μl
对照品(士的宁含量0.12mg/ml,马钱子碱含量0.1mg/ml)色谱图:
供试品(马钱子样品)色谱图:
经计算,本品含士的宁(C21H22N202)为0.69%,马钱子碱(C23H26N204)为0.67%。而药典要求士的宁含量应为1.20%~2.20%,马钱子碱含量不得少于0.80%,所以该药品不符合药典要求,也就是说按药典要求,该药品为不合格品。
该方法检测马钱子中的士的宁、马钱子碱快速、方便,准确、可靠,视为好方法。该检测的成功不仅取决于方法的可靠性,选择一款优良的色谱柱也是检测成功的关键。
该方法检测该样品已经是非常快速了,但如果您还不满足,还想再快速些,那您把流动相换为乙腈:0.01mol/L庚烷磺酸钠与0.02mol/L的磷酸二氢钾等量混合(用10%磷酸调节pH值2.8)=25:75,这样检测时间应该还会提前3-5min,检测会更快速。如果您还不满足,您可以继续加大流动相中乙腈含量,但一定得确保样品间分离度,否则影响检测结果的准确性,那样就得不偿失了。
快速、准确的检测是我们所期待的,选择检测方法和优化方法一定得立足于现实情况。当然选择色谱柱非常重要,一款优秀的色谱柱,所带来的结果往往都是可喜的,都超乎于事半功倍。