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毛细管电泳（CE）

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主题：【已应助】求助，MDQ 做SDS时，走样品缓冲液15分钟前后总是出现不规律的杂峰

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szdavid1

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发表于：2015/05/21 09:27:10 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

单位一台买了10多年的贝克曼MDQ，不经常使用，所以经验不多，以前做过EPO的CE，自制毛细管，按欧标EPO的CE检测方法，效果还可以。

最近想做一些单抗的CD SDS，正好也有一贝克曼年代的SDS试剂盒（过期是肯定的，盒子见图），说明书也不见了，网上找了一份新试剂盒的说明书，按此来做。
大概过程是先0.1N碱洗，再0.1N酸洗，然后再水洗，再上胶，再进样……为保险起见，先不上样，用试剂盒里的样品缓冲液代替样品，但发现总在15分钟前后出现不规律的峰，比较尖锐，早上开始第一次，出现一个或两个峰，接着再重复时，这些峰越来越多，似乎没有规律，不知怎么回事？是样品缓冲液的问题，还是毛细管，或者做的条件问题？
水平和经验不足，特请教大家，谢谢！

这是有些年头的试剂盒

试剂盒里的胶液和样品缓冲液，下面所附的图都是跑的这个缓冲液

早上第一次样品缓冲液，10-15分钟内出现两个峰

第二次跑，峰的时间和高度有变化

第三次跑，峰的时间和高度又有变化

第四次，再有变化

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2015/5/21 10:00:28 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

这是所用的方法，其中70PSI的压力改为了 40，各个过程时间延长了一些。

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2015/5/21 14:35:14 Last edit by szdavid1

CEcret

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2015/5/21 13:44:50 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

从瓶子的标签看，过期将近15年。据我个人所知那个时候的CESDS配方和现在的不同。
从你的图谱来看，这些杂峰尖锐且很窄，感觉像是气泡。你在开始的时候有没有做preconditioning，以及分离过程有没有两段加压。
如果能看到电流图，会对我们分析问题有所帮助

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2015/5/21 14:30:35 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 CEcret(v2812644) 发表:
从瓶子的标签看，过期将近15年。据我个人所知那个时候的CESDS配方和现在的不同。
从你的图谱来看，这些杂峰尖锐且很窄，感觉像是气泡。你在开始的时候有没有做preconditioning，以及分离过程有没有两段加压。
如果能看到电流图，会对我们分析问题有所帮助

谢谢！
试剂过期好久，外单位要做样品，不太想再花近2万去买新的试剂盒了，所以，将近就着用用。
另外，我试过不上样直接跑，结果没有这些峰，基本是平的一条线。然后我又用纯水上样，结果和上面差不多，感觉是只要有上样动作，不管是缓冲液还是水，就会出现上面的杂峰，也许真是哪里进的气泡。
开始做过毛细管的预处理过一次，处理过程按说明书如下，这个处理每天都要进行吗？我看和走样的程序差不多，谢谢！