主题：【原创】食品中杀草强残留量的检测方法

1 材料与方法

1．1 材料与试剂

乙腈、二氯甲烷、丙酮(均为色谱纯)；正己烷、冰乙酸(均为分析纯)；乙酸缓冲液(在800mL 0．05mol／L的乙酸溶液中加入0．05mol／L的乙酸钠溶液至1000mL)；磷酸盐缓冲液(在0．05mol／L磷酸钠溶液中加入10％的磷酸调节pH3．O)：碱性甲醇【氨水．甲醇(5：95，W功】；荧光胺(纯度大于98％)：杀草强标准品(纯度大于97％)Sigma公司；实验用水为超纯水。

1．2 仪器与设备

PCX混合阳离子交换柱；l 200型高效液相色谱仪【配荧光检测器(FED)】美国安捷伦公司；高效液千H色谱．质谱仪【配大气压电离源(APci)】美国Waters公司；旋涡混合器；超声波清洗器(用于流动相脱气)；离心机；旋转蒸发仪；氮气吹干浓缩装置。

1．3 实验条件

1．3．1 液相色谱条件

色谱柱：Ultimate XB-C18(4.6 × 250mm，5μm)；ODS反相柱(150ram×4．6ram，5 um)或相当者；柱温：40℃；流动相：磷酸缓冲液。厶腈(70：30，Wn；流动相流速：1．OmL／min；检测波长：激发波长380hm；发射波长484nm；进样量：2 0 u L。

1．3．2 质谱条件

色谱柱：Acquity UPLC BHC C,K50mm×2．1mm，1．7¨m)或相当者；流动相：乙腈．水，梯度洗脱，时间从0．Omin到0．5rain由50：50(WV)逐渐变化到80：20，0．5min到2．Omin维持80：20，2．Omin到2．5min由80：20逐渐变为50：50；柱温：40℃；进样最：10 uL。

1．3．3 MS／MS参考条件

电离方式：大气压电离正离子模式：离子喷雾电压：27V；雾化气：氮气(40psi)；干燥器：氮气；流速10L／min；温度350℃；碰撞气：氮气：扫描模式：多反应监测(MRM)；母离子m／z 85；定量子离子m／z43；定性子离子m／z 57；碰撞能量：m／z 85>m／z 57为56．9／11eV；m／z 85>m／z 43为58．1／11eV；裂解电压：100V；停留时间：0．3 s。

1．4 实验方法

1．4．1 标准溶液的配制

标准储备液：称取杀草强标准品10．Omg，用甲醇配成0．1mg／mL的标储备液；标准工作液：根据需要取适当体积的标准储备液，用流动相配制成标准工作液，该工作液现用现配。

1．4．2 液相色谱法样品处理及净化

谷类、豆类、啤酒花及种子类，粉碎过420 iam标准筛，准确称取其中10．09样品；水果蔬菜，将样品捣碎混匀，必要时加适最的水，准确称取相当于10．Og的样品：末茶：直接称取10．Og样品；末茶以外的茶：将样品切碎，称取其中10．09样品。以上样品加入lOmL二氯甲烷，20mL冰乙酸溶液(体积分数1％)放置20min，均质后5000r／rain离心5min，过滤后取6mL滤液(相当于2．09样品)净化。净化前先活化PCX混合阳离子交换柱，先用3mL甲醇洗涤PCX离子交换柱，然后再用3mL水洗涤。将6mL提取液过已活化的PCX混合阳离子交换柱，分别用3mL甲醇和3mL水洗涤交换柱， 弃去流出液，然后用4mL碱性甲醇洗脱交换柱，收集洗脱液，准确移取2mL洗脱液，40～45℃水浴条件下氮气吹干，用0．9mL乙酸缓冲液溶解残渣。此溶液中加入100¨L体积分数0．25％的荧光胺丙酮溶液，充分振荡混匀后放置1h，过0．45 IJm滤膜后同标准系列一起用仪器测定。

1．4．3 质谱法样品处理及净化

前半部分I—J 1．4．2节，从40～45℃水浴条件下氮气吹干，用1mL乙腈溶液(50：50，ym定容，0．22¨m滤膜过滤后用于质谱测定。

1．44 液相色谱测定

用流动相将杀草强标准储备液逐级稀释得至U质量浓度为0．02、0．05、0．1、0．5、1．Omg／L的标准工作液，质最浓度由低到高进样检测，以峰面积一质量浓度作图，得到标准曲线。在}：述色谱条件下， 杀草强的保留时间约为10min。标准品的液相色谱图参见图。待测试样中的杀单强的含晕应在所选择的标准系歹U质量浓度范围内，如果待测样液中杀草强的含量超过线性范围，应稀释后再进样检测，给出检测结果。

1．4．5 质谱定最测定

1．4．6 质谱定性判定

按照上述条件测定试样和标准工作液，如果试样质量色谱峰保留时间与标准一致(变化范围在±2．5％之内)：样品中目标化合物的两个离子的相对丰度比与质量浓度相当的标准溶液的相对丰度在允许的相对偏差内(离子相对车度>50％，允许相对偏差±20％；离子相对丰度20％--'50％，允许相对偏差±25％；离子相对丰度10％～50％，允许相对偏差±30％)。

1．4．7 空白实验

实验过程除不加样品外，其他按上述测定步骤进行。