主题：【第八届原创】茶叶中氟虫腈残留量的检测

茶叶中氟虫腈残留量的检测

实验目的（实验背景及目的）：
日本食品卫生法肯定列表制度关于茶叶中氟虫腈农药残留限量基准值为0.002mg/kg，即2ppb；同时，氟虫腈是日本2015年度进口茶检疫所残留农药监控项目。基于以上背景，我们进行了氟虫腈检测方法的探究。
实验方法（前处理、标准品配置、色谱条件等）：
一、前处理：
1.1    使用器具：可调高速匀浆机、漩涡混合器、电子分析天平、具塞刻度离心管(50ml) 、离心机、氮吹仪、移液枪5ml、移液枪1ml、
安谱固相萃取小柱（GCB/PSA双层柱）(500mg/500mg/6ml)
1.2    试剂：乙腈HPLC、正己烷HPLC、丙酮HPLC、纯水、氯化钠 A.R、无水硫酸钠：分析纯，650℃煅烧4h干燥器储存备用。
丙酮+正己烷(3+7):量取300ml丙酮，加入700ml正己烷，摇匀备用。
1.3 提取：
称取经粉碎样品2.5g于50ml具塞塑料离心管中，加水10ml，混匀静置15min。准确加入20ml乙腈，匀浆机高速浸提1min，3000r/min离心5min。移取上清液于另一50ml具塞塑料离心管中，残渣再准确加入20ml乙腈，匀浆机高速浸提1min，3000r/min离心5min，移取上清液。合并两次上清液并定容至50ml。
1.4液液萃取：
准确移取取10ml上清液加入5g氯化钠振荡3min，离心3min，吸取乙腈层于另一50ml具塞塑料离心管中，加入无水硫酸钠振荡3min脱水，离心3min后吸取乙腈于另一50ml具塞塑料离心管中，无水硫酸钠层再加入5ml乙腈重复操作一次，合并两次乙腈层。加入10ml正己烷振摇3min，离心1min，弃去上层正己烷相，加入10ml正己烷重复操作一次。下层乙腈相收集于100ml鸡心瓶中，40℃水浴减压浓缩至近干。以1ml丙酮+正己烷(3+7)溶解残渣，待净化。
1.5 净化：
移取上述提取液过GCB/PSA双层柱 (使用前6ml丙酮+正己烷(3+7)预淋)，自然垂滴，待上清液完全流出后，用15ml丙酮+正己烷(3+7)淋洗。收集淋洗液，于40℃氮吹至近干。用乙腈溶解并定容至 1ml，供LC-MS/MS测定用。
二、标准品
2.1氟虫腈标准品 100mg/kg  AccuStandard
2.2氟虫腈标准储备液：将100mg/kg的氟虫腈标准液以乙腈稀释成适当浓度的标准工作液；
2.3氟虫腈标准工作液：吸取100ul各浓度标准工作液，以空白基质定容至1ml，分别稀释成0. 2 ug/kg、0.4 ug/kg、0.6 ug/kg、0.8 ug/kg、1.0 ug/kg。
三、色谱条件
3.1仪器：高效液相色谱-串联质谱：岛津LC-20A、 AB SCIEX TripleQuad 4500
3.2色谱柱：RESTEK Ultra Aqueous C18，规格：100*2.1mm，3um
3.3分析条件：
3.3.1液相参数：流速：350ul/min ；进样量：2ul；柱温：40℃；
          流动相A：水（含0.1%甲酸、2mmol/L乙酸铵）；流动相B：乙腈
流动相梯度洗脱程序见下表：

梯度时间/min	流动相比例(%)
	流动相B	流动相A
0.01	20	80
4.00	95	5
9.00	95	5
9.01	20	80
14.00	Stop

3.3.2质谱参数：
Ion Source：ESI；  Scan type： MRM； Polarity：Negative；
IS： -4500V；TEM：550℃； CUR：30Pa； GS1：55Pa；GS2：55Pa；

定量离子对	定性离子对	Time(msec)	ID	DP	CE	EP	CXP
434.7/329.8	434.7/329.8	400	Fipronil  1	-80	-21	-10	-13
	434.7/249.9	400	Fipronil  2	-80	-36	-10	-13

实验过程照片：