我看了一篇关于D,L-氨基酸检测的文章,用c-18柱子和柱前衍生的办法能分析某些氨基酸,衍生剂是OPA和Boc-L-Cys,我的衍生剂配法是两种衍生剂各0.1g用1mL无水乙醇溶解,加入100μL的巯基乙醇做还原剂,再用pH6.5的硼酸盐缓冲液定容至10mL,在线的柱前衍生。流动相是磷酸盐:乙腈:四氢呋喃(A:92:5:3,B:45:50:5,V:V)线性洗脱。柱温40℃,荧光检测,激发和放射波长为334和443。
我做的标样是0.1g/L的D-Arg和L-Arg,但是同一个样品跑出来的峰毫无重现性,也看不出什么规律,有时2分钟就出峰,有时20多分钟出峰,峰形也很怪。
请教我的衍生剂配法有没有问题,问题可能出现在哪里呢,还有什么要注意的吗?我第一次用
液相,求教啊