原文由 小不董(doxw0323) 发表:
样品中加入溴化锂和体系里加溴化锂还是有区别的,你只用了一根柱子?从你最后一张图看,有点怀疑你样品中加入溴化锂后峰是溴化锂的信号峰。
你用流动相做样品,加入20mm的溴化锂看看其色谱峰呢。
另标准样品的峰形如何,有加入更高的溴化锂色谱峰吗?
还有DMF体系很容易吸水,溴化锂也容易吸潮,若体系里含有过多的水分,做起来就很痛苦。你可以测定下体系流动相中的水分含量。
原文由 shamy(v3112183) 发表:按照你的说法,有可能样品的羟基影响了,需要增加更多的溴化锂来消除其化合键的影响。
非常感谢你的关注和回答。
我用的UV检测器,只有一根柱子,设定的波长是420nm,是我的样品的吸收波长,所以可能不是溴化锂的峰吧。
我的整个体系的溶剂已经含有20mM 的溴化锂了,之所以用20mM是因为,在样品瓶里面加溴化锂可以得到比较好看的峰形(从5 mM逐渐经过10 mM--- 15 mM 加到20 mM的)。
每次在样品瓶加的比体系里面多一些溴化锂的话,信号就好好看很多,但是把整个体系溴化锂浓度增大后,却又得不到好的结果了,然后再加多在样品瓶又发现会变好,然后体系都增加溴化锂浓度后又不行了。。。一路过来都是这样,得到的结果不合理而且无法解释。。。
当然这个结果只是对含有很多OH的样品,我的其他样品(不含OH,含有acetyl保护基团的)都是没问题的。
我会按照您的建议再试一下,然后再给你看一下结果。
希望你可以再帮我分析下原因。
非常感谢!
原文由 峰0310(v3119261) 发表:
能不能问一下你配的样品浓度是多少啊?
我现在在做P4VP聚乙烯基吡啶,用DMF相的GPC做的测试,55℃的柱温,流动相应该是含有0.1%溴化锂的DMF。第一次测的时候,得到的是很完整的单峰,但是之后测的都是奇奇怪怪的峰形,双峰拖尾什么情况都有。。配样的用的就是0.1%溴化锂的DMF,非常郁闷。
然后因为我是要做嵌段嘛,接了第二段的时候,也是第一次做GPC的结果也是非常好看,我就觉得是第二段屏蔽掉了PVP里面吡啶与柱子的相互作用,所以峰形变好。但是之后测的结果又开始奇怪了。
我也试了改变溴化锂的浓度,用0.5%溴化锂的DMF去配2mg/ml的样品,做出来的P4VP的结果还是非常奇怪。
现在是异常郁闷,因为用的是ATRP做的反应,不应该出来这么奇葩的结果的
原文由 shamy(v3112183) 发表:
我用的浓度是根据聚合单元的浓度,是5*10e-5 mol / L, 聚合单元分子量约在1700. 我用的LiBr的浓度已经到了20 mmol / L了,算起来已经是大大的超过样品的浓度了,应该足够消除polymer之间的相互作用。
我跟你一样的情况,就是刚开始的结果很好,但是后面测试就不行了,重复不出之前的好结果,非常郁闷。老板非说是我的问题,认为我中间配流动相的时候可能出错了。然后我就重新换到低浓度LiBr,然后逐渐增加到20 mM了,可是还是没有解决问题。。。不可思议。。。。。
原文由 峰0310(v3119261) 发表:
稍微算了一下你的样品浓度,浓度好低啊。。
我看到你最上面放出来的10mM-200mM LiBr in vial的那个图,峰形还不错的,流动相的LiBr浓度大概在多少啊?
因为我也在摸索测试条件。。看了很多帖子,也查了一些文献,发现做DMF相的GPC要做好实在太难了,尤其是聚合物上有大量的极性基团的。。我觉得你还好啊,自己组里面就有GPC可以自己改变流动相条件这些,我都要送到学校的测试平台去做,那边的测试条件又给定了,我只能自己想办法去解决。。我是看到你改变配样的DMF中的LiBr的浓度,峰形会变好,所以感觉可以尝试一下
原文由 shamy(v3112183)发表:色谱柱有关,LiBr并不一定越多越好,在特定浓度下的吸附不同。条件需要反复测试。原文由 峰0310(v3119261) 发表:
稍微算了一下你的样品浓度,浓度好低啊。。
我看到你最上面放出来的10mM-200mM LiBr in vial的那个图,峰形还不错的,流动相的LiBr浓度大概在多少啊?
因为我也在摸索测试条件。。看了很多帖子,也查了一些文献,发现做DMF相的GPC要做好实在太难了,尤其是聚合物上有大量的极性基团的。。我觉得你还好啊,自己组里面就有GPC可以自己改变流动相条件这些,我都要送到学校的测试平台去做,那边的测试条件又给定了,我只能自己想办法去解决。。我是看到你改变配样的DMF中的LiBr的浓度,峰形会变好,所以感觉可以尝试一下
确实,如果送到学校做,他们固定了测试条件的话,不好调节。你可以看看其他学校的机器有没有合适你的样品的测试条件的。
而我,就是看到在样品瓶中多加一些LiBr会使得峰形变好,才开始在整个流动相里面多加LiBr的。我的困惑点就是,比如,单纯的在样品瓶加到20 mM的浓度的LiBr,峰形会非常好看,但是我把流动相也换成含有20 mM的LiBr的时候,就得不到好的峰了。。。。。。。
还有就是,就是我的打进去的样品的浓度是一样的(因为我是从一个比较高浓度的稀释的每一个样品瓶的),当在瓶子里加不同量的LiBr的时候,得到的峰的信噪比非常不同,具体就是瓶子里的LiBr的浓度越高,信号越强,信噪比越好,非常的困惑。。。。。。。。。