原文由 夏天的雪(bingwang228) 发表:说明书中用了五种物质量(甲状腺球蛋白、γ-球蛋白、卵清蛋白、核糖核酸酶A、对氨基苯甲酸),但最后以对氨基苯甲酸来计算的塔板数。我们是每做一次检验都要进行柱效检查的,基于当初方法开发时用的BSA做柱效,所以一直都用它来做。现在我们想换一种更纯点的物质来做,但不知道在选择柱效检查的试剂时有没有要遵循一定的原则?希望能给予指点。谢谢呀!
说明书中也是用BSA做住效检测的吗?不同物质测出来的柱效可能会产生差异,您可以在初次使用时测一下柱效,然后下次用同样的物质,同样的色谱方法进行柱效测定比较
原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:以前面的小峰来考察灵敏度和分离度,那仅仅关注柱效是不是不太合理(我们目前整个实验考虑的点有:1、空白,基线是否平衡;2、柱效,是否不小于8500;3、系统适应性的保留时间和峰面积CV)?我们现在的状况是前面会出现几个小峰,都不太能分开,而且最开始出现的那个峰一般是只要做都会有,峰面积大概500+,但是最近观察到有时候开始是没有或峰很小(峰面积几十),但多走几针后峰面积会逐渐增大,这是不是说最初的没有或峰面积很小,是柱子的灵敏度还没到最佳状态,所以开始分辨不出来?但我说的这些情况,都是在满足柱效要求(不小于8500)的基础上出现的。有些困惑,希望能解答,辛苦了!另外如果要以前面的小峰考察灵敏度和分离度,怎么操作了,问题也许有些小白,请耐着性子还是给予一些指点,谢谢了!
用常做的物质来作为柱效检测标物我觉得还是比较好的,前面有个小峰更好,还可以考察灵敏度与分离度。标准上的柱效测定物的选择原则是易得、稳定、响应因子适当、好测,并不是以应用为目的,只是提供参考。比如C18柱测一些复杂样品测不好,但以萘来检测柱效还是很高。
原文由 blueskybe(blueskybe)发表:学习了原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:以前面的小峰来考察灵敏度和分离度,那仅仅关注柱效是不是不太合理(我们目前整个实验考虑的点有:1、空白,基线是否平衡;2、柱效,是否不小于8500;3、系统适应性的保留时间和峰面积CV)?我们现在的状况是前面会出现几个小峰,都不太能分开,而且最开始出现的那个峰一般是只要做都会有,峰面积大概500+,但是最近观察到有时候开始是没有或峰很小(峰面积几十),但多走几针后峰面积会逐渐增大,这是不是说最初的没有或峰面积很小,是柱子的灵敏度还没到最佳状态,所以开始分辨不出来?但我说的这些情况,都是在满足柱效要求(不小于8500)的基础上出现的。有些困惑,希望能解答,辛苦了!另外如果要以前面的小峰考察灵敏度和分离度,怎么操作了,问题也许有些小白,请耐着性子还是给予一些指点,谢谢了!
用常做的物质来作为柱效检测标物我觉得还是比较好的,前面有个小峰更好,还可以考察灵敏度与分离度。标准上的柱效测定物的选择原则是易得、稳定、响应因子适当、好测,并不是以应用为目的,只是提供参考。比如C18柱测一些复杂样品测不好,但以萘来检测柱效还是很高。