主题：【原创】关于内标法的问题

原文由 wslmpol(wslmpol) 发表:
根据你的实验描述，误差来源有两个：标准品和样品的称量误差；内标溶液的移液误差
1. 称量误差：你用是万分之一天平，也就是精确至0.1mg。那么称取10mg可能产生?0.5mg的误差；想降低称量误差有两个办法：使用更精密的天平或增加称样量。
2. 移液误差：一般情况，移取1ml液体的误差水平在1%左右。解决办法：用称量代替移液，即对照样和样品都用天平称移入的内标重量，用这个重量计算加入的内标物质量。另外，你用峰面积法来计算移液的RSD是不准确的，因为HPLC进样的RSD你没考虑。
至于定容误差，在内标法里可以忽略不计。

以上为个人经验，不一定准确。

原文由 有水有渝(xky0230699) 发表:
同意楼上的意见，容量误差可以通过检定解决，称液操作误差只能通过增加熟练度与准确度解决。

原文由 qqqid(qqqid) 发表:
楼主2%的误差都不能接受，这实验是没法做的。
每一件量器都有设计误差，移液管误差大约1%，容量瓶定容误差大约1%，万分之一天平0.1mg。
具体到楼主的实验，标准品纯度未知，称量标准品误差1%，定容误差1%，移液误差1%，再定容误差1%，最基本的步骤，还没上仪器误差就已经超2%了。

原文由 你一见我就笑2169(v2650137) 发表:
非常感谢您的解答。
我们使用的是十万分之一的天平，称量这方面应该还好。
关于仪器自身的进样误差，这个在重复性里考察过多次，RSD基本在0.3%左右，已经很小了，再加上这个方面无法避免，只能考虑尽量减少移液造成的误差了。
关于移液误差这个有什么更好的方法来权衡吗？

原文由 你一见我就笑2169(v2650137) 发表:
关于操作这块有没有什么好的办法来衡量？
我一直做QC工作前后6年时间，之前单位也经常做含量测试，个人感觉操作应该还算规范，不过确实没有专业的考核过，有好的办法确实有必要自查一下。之前的公司含量测试要求两个平行样品的结果的极差不超过0.60%，平时做样时基本上都可以达到，所以就没怀疑过这个原因。
我不明白的是以前公司使用的是安捷伦的1290（DAD检测器）和1120（UV），含量测试时主峰峰面积基本上在几千万的样子（纵坐标单位是mAU）,峰高一般约为80；现在的公司使用的是安捷伦1260（DAD检测器），含量测试时主峰峰面积基本上在7500的样子（纵坐标单位是mAU）,峰高一般约为250.
尽管待测物质不一致，但峰高都不高的情况下，面积竟然差了4个数量级，不知道这个是什么原因造成的？

原文由 wslmpol(wslmpol) 发表:
个人认为操作要注意两块：重现性和准确性。重现性比方说用移液管移液，每次的操作方式必须一致，不能一次靠壁下一次不靠壁。准确性则需要累积经验，哪种实验操作方式方式能得出更准确的数据。
色谱内标法的RSD是可以达到千分位水平的。
峰高80面积几千万这个不太可能吧？一般来说风只要峰形相差不大，面积和峰高是成正比的。