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液相色谱（LC）
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主题：【讨论】液相色谱测小分子量肽的柱子选择

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junqingzhou11
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发表于：2006/12/07 10:00:00 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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我准备用高效液相色谱测酶水解蛋白的肽的分子量（小于1万道尔顿），应该用凝胶柱吧，不知哪种型号的好些呢？
洗脱液用什么呢？可以用蒸馏水么？
另外如果是液相的半制备，制备量大概是多少呢？
推荐答案：tianru的爸爸回复于2006/12/11

如果说要测分子量，可以用凝胶柱。
但如果要测小分子量，那两个（TSK 2000 SW/PW）都测不了5000以下的，至少测不准。
建议用质谱测定分子量，理由就不用说了吧。
补充答案：

shaoylc回复于2006/12/10

一般来说肽段用的是乙腈，水，磷酸或磷酸盐类的缓冲溶剂这些东西的混合体系。很多情况下PH值可能到2左右。所以柱子的选择还要考虑这些因素。我用C18柱做过，不过分子量只是一两千左右，没有到八九千。这个分子量范围反相柱不知道容不容易堵，柱压怎么样。你再看看文献。

Easy-Boy回复于2006/12/08

用毛细管电泳做更好吧？

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2006/12/8 8:22:00 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用毛细管电泳做更好吧？
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junqingzhou11
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2006/12/10 9:41:00 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
谢谢你的关注！
但是我的问题您还是没能让我满意，现在很多人用液相测，很实在的，因为存在要分离制备而不仅仅是分析。
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tianru的爸爸
lxdongzi2003
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2006/12/10 10:57:00 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 junqingzhou11 发表:
我准备用高效液相色谱测酶水解蛋白的肽的分子量（小于1万道尔顿），应该用凝胶柱吧，不知哪种型号的好些呢？

具体是用凝胶柱还是用反相柱，要看你的目的是什么。
如果只是想把酶水解的产物有所分离，什么都可以。
如果想把每一个产物得到具体的分离（甚至鉴定序列，那要用反相）。
如果只是想看看酶水解的程度，可以用凝胶，这个相对简单，好分析。
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tianru的爸爸
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2006/12/10 11:04:00 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 junqingzhou11 发表:
洗脱液用什么呢？可以用蒸馏水么？

洗脱液用什么，要看具体的蛋白/多肽，因为各种蛋白多肽的极性、溶解性不一样。
至于蒸馏水，一般不用，无论是凝胶柱，还是反相柱，都尽量避免用纯水来洗脱。
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junqingzhou11
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2006/12/10 11:06:00 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我准备用凝胶柱测水解物的分子量范围，然后根据不同的范围收集肽，然后再在以后的分析中用。那时候可能要分纯，测序等等。
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tianru的爸爸
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2006/12/10 11:11:00 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 junqingzhou11 发表:
我准备用高效液相色谱测酶水解蛋白的肽的分子量（小于1万道尔顿），应该用凝胶柱吧，不知哪种型号的好些呢？
洗脱液用什么呢？可以用蒸馏水么？
另外如果是液相的半制备，制备量大概是多少呢？

半制备和制备的量一般没有明确的数，少量的制备一般就被称为半制备，如果制备的量比较大（具体有多大，可以是g级，也可以是mg级，甚至是Kg级才被成为制备，而非半制备），就称为制备。
有一个是肯定，无论是半制备液相，还是制备液相，其液相色谱分离后的产物是我们想要得到的产物。

如果想用酶水解蛋白，然后再用液相分离水解产物，最后用MS等手段解析水解产物，那这时的制备量可以到ng级就够用了，也就是酶水解蛋白时，蛋白的量有10到20微克就可以了。
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junqingzhou11
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2006/12/10 11:29:00 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
您讲的比较详细，十分感谢，制备这方面稍懂了，
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蒙哥麻利
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2006/12/10 20:06:00 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
学习了,希望楼主做完了上传些总结性的东东,
支持中
盼望中
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shaoylc
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2006/12/10 22:07:00 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一般来说肽段用的是乙腈，水，磷酸或磷酸盐类的缓冲溶剂这些东西的混合体系。很多情况下PH值可能到2左右。所以柱子的选择还要考虑这些因素。我用C18柱做过，不过分子量只是一两千左右，没有到八九千。这个分子量范围反相柱不知道容不容易堵，柱压怎么样。你再看看文献。
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junqingzhou11
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2006/12/11 11:36:00 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我准备买根凝胶柱测分子量低于一万道尔顿的小肽混合物，这根柱子一万多，所以现在考虑买哪种型号的。
查资料有TSK gel 2000 SWxl
        TSK gel 2000 PW系列的，
根据商家提供资料，测分子量5000以上，他们又说可以测5000以下的，我现在在慎重考虑，不知谁已做过这方面的试验，请交流一下经验。
谢谢！
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