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杀菌设备效果评价方案及验证
西安国联质量检测技术股份有限公司
食品事业部:淮瑞娟
1 检测步骤1.1
细菌
菌液制备:将菌株于接种于LB平板,36℃培养24h,挑取菌落于0.85%无菌生理盐水中,稀释浓度至10
5~10
6CFU/mL。
在130mm×130mm的方形培养皿中注入30mL营养琼脂,倒置冷却后吸取200μL菌液于营养琼脂涂布。将涂布好的培养基用紫外灯、臭氧发生器和负离子发生器同时处理48h,后用高温蒸汽喷枪高温处理7~10min,以未处理含菌平板为对照,36℃恒温培养48h,3次重复,以消杀率表示消杀设备的消杀能力。
消杀率(%)=(对照菌浓度-处理后菌浓度)/对照菌浓度×100。
1.2
真菌
孢子悬浮液制备:将菌株于接种于PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂),28℃培养,待产孢后,将菌丝刮取于无菌蒸馏水中,充分摇匀后用无菌脱脂棉进行过滤得到孢子悬浮液,并用血球计数板调节浓度至10
5~10
6CFU/mL。
在130mm×130mm的方形培养皿中注入30mLPDA培养基,倒置冷却后吸200μL取孢子悬浮液于PDA培养基涂布。对含菌平皿进行消杀处理,处理方法同1.1,以未处理含菌平板为对照,25℃恒温培养3d,3次重复,以消杀率表示消杀设备的消杀能力。
消杀率(%)=(对照菌浓度-处理后菌浓度)/对照菌浓度×100。
1.3 蟑螂
将20只活体蟑螂置于130mm×130mm的方形培养皿,进行消杀处理,处理方法同1.1,以未处理蟑螂为对照,3次重复,以消杀率表示消杀设备的消杀能力。
消杀率(%)=(对照活体蟑螂数-处理后活体蟑螂数)/对照活体蟑螂数×100。
1.4 蟑螂卵
将15枚置于130mm×130mm的方形培养皿,进行消杀处理,处理方法同1.1,以未
处理蟑螂卵为对照,28℃恒温培养,3次重复,处理后连续观察蟑螂卵的孵化状态,以消杀率表示消杀设备的消杀能力。
消杀率(%)=(对照蟑螂孵化数-处理后蟑螂孵化数)/对照蟑螂孵化数×100。
1.5 草履虫
在130mm×130mm的方形培养皿中注入30mL含草履虫水样,处理方法同1.1,以未处理草履虫为对照,3次重复,处理后在显微镜下观察草履虫存活状态(30个视野),以消杀率表示消杀设备的消杀能力。
消杀率(%)=(对照活体草履虫数-处理后活体草履虫数)/对照活体草履虫数×100。注:活体草履虫数的个数为显微镜一个视野下的个数。
1.6 绿藻
将球形绿藻置于130mm×130mm培养皿,进行消杀处理,处理方法同1.1,以未处理绿藻为对照,3次重复,处理后连续观察绿藻的存活状态,以消杀率表示消杀设备的消杀能力。
1.7 小球藻
在130mm×130mm的方形培养皿中注入30mL含小球藻水样,处理方法同1.1,以未处理小球藻为对照,3次重复,处理后在显微镜下观察小球藻存活状态(30个视野),以消杀率表示消杀设备的消杀能力。
消杀率(%)=(对照活体小球藻数-处理后活体小球藻数)/对照活体小球藻数×100。
2 结果与分析2.1 真菌
由表1可知,该设备对黄曲霉、黑曲霉、白色念珠菌、鲁氏毛霉和青霉的消杀率均为100%。试验结果表明,该设备能完全杀灭黄曲霉、黑曲霉、白色念珠菌、鲁氏毛霉和青霉。
菌株 | 对照菌浓度(cfu/g) | 处理后菌浓度(cfu/g) | 消杀率(%) |
黄曲霉 Aspergillus flavus | >2×104 | 0 | 100 |
黑曲霉 Aspergillus niger | >2×104 | 0 | 100 |
白色念珠菌 Monilia albican | >2×104 | 0 | 100 |
鲁氏毛霉 Mucor roxianus | >2×104 | 0 | 100 |
青霉 Penicillium citrinum | >2×104 | 0 | 100 |
注:白色念珠菌和黑曲霉未经高温蒸汽消杀。
2.2 细菌
由表2可知,该设备对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌的消杀率均为100%,对沙门氏菌、志贺氏菌、鼠伤寒沙门氏菌和粪链球菌的消杀率分别为99.98%、99.88%、99.97%和99.99%。试验结果表明,该设备能完全杀灭金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌,其次为粪链球菌、沙门氏菌和志贺氏菌,对鼠伤寒沙门氏菌的消杀率略低但均在99%以上。
菌株 | 对照菌浓度(cfu/g) | 处理后菌浓度(cfu/g) | 消杀率(%) |
金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus | >2×104 | 0 | 100 |
沙门氏菌 Salmonella spp. | >2×104 | 5 | >99.98 |
志贺氏菌 Shigella spp. | >2×104 | 25 | >99.88 |
铜绿假单胞杆菌 Pseudomonas aeruginosa | >2×104 | 1 | 100 |
鼠伤寒沙门氏菌 Salmonella typhimurium | >2×104 | 6 | >99.97 |
粪链球菌 Enterococcus faecalis | >2×104 | 2 | >99.99 |
注:金黄色葡萄球菌未经高温蒸汽消杀。
2.3 蟑螂
经消杀后蟑螂全部死亡,消杀率为100%(表3)。试验结果表明,该设备对蟑螂的消杀效果强,能完全杀死活体蟑螂。
项目 | 对照活体蟑螂数(只) | 处理后活体蟑螂数(只) | 消杀率(%) |
樱桃红蟑螂 | 20 | 0 | 100 |
2.4 蟑螂卵
经高温消杀后对蟑螂卵28℃恒温培养连续观察孵化情况,对照蟑螂卵不断有蟑螂孵出,处理后蟑螂卵无蟑螂孵出。试验结果表明,该设备能完全杀死蟑螂卵,抑制蟑螂的孵化,对蟑螂卵的消杀率为100%。
2.5 绿藻
经消杀后对绿藻连续观察,绿藻均变黄萎蔫停止生长,后逐渐死亡。试验结果表明,该设备能完全杀灭绿藻,抑制绿藻的生长,消杀率为100%。
2.6 草履虫
经消杀后水中出现大量白色沉淀物,在显微镜下连续观察30个视野,发现无完整形态草履虫存在,呈破碎状态。试验结果表明,该设备能完全杀灭草履虫,并使其细胞解体,消杀率为100%。
2.7 小球藻
经消杀后水中出现大量浅绿色沉淀物,在显微镜下连续观察30个视野,发现完整形态的小球藻明显减少,消杀率为91.81%(表4)。试验结果表明,该设备对小球藻的消杀效果良好,可杀灭90%以上的小球藻,并使其细胞解体。
项目 | 对照活体小球藻数(个) | 处理活体小球藻数(个) | 消杀率(%) |
小球藻 | 293 | 24 | 91.81 |
注:活体小球藻数的个数为显微镜一个视野下的个数。
3 注意事项3.1 试验中使用的设备会产生大量的臭氧,试验需要做好防护。
3.2 试验中使用到致病菌,试验完毕后所有物品必须经过灭菌处理。