主题：【已应助】生产用动物细胞的传代稳定性实验

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发表于：2020/01/19 12:45:40 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

小弟刚入行，搞CHO悬浮细胞的发酵生产，最近要做细胞株的传代稳定性，但药典等资料很笼统，想请教各位几个问题：
1. 传代稳定性实验一般要传多少代合适呢？
2. 检测目的蛋白的表达稳定性，每一代细胞应培养多长时间取样呢？是不是每代细胞都要补料培养半个月再测啊？
3. 检测细胞遗传稳定性，需要提DNA是吧，那每一代细胞培养多长时间取样呢？
4. 有木有详细点的传代稳定性实验的protocl可以参考啊？
先谢谢大家啦！

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2020/1/19 13:04:48 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

传代稳定性或者终末端细胞稳定性指标可以探讨一下，可以间隔进行一些指标的检测，例如0、10、20、30、40、50之类
遗传稳定性：顾名思义就是遗传物质在。
非整合型的，质粒（目的基因和抗性存在、国外还对质粒拷贝数检测），并且目的基因序列是正确的。
整合型的，整合位点、拷贝数、目的基因完整性即不缺少、没插入（Southern/Northern）、目的基因序列及多位点整合时mRNA序列正确。
细胞表型稳定性：形态没变、生长速率没变。
产物稳定性：产量不低于多少、或者活性不低于多少。
有几点想和向大家讨论的：
1，国内很多都习惯采用传一次算一个代次，passage number来算，国外看到许多品种是按倍增来算的即generation number来模拟或者考察的，我们是两个都做，想看看同行一般如何计算的？如果是传一次算一代（passage），那如果规定一代的培养时间比较科学，尤其是大肠杆菌类的发表文章，有人6h、有人12h，比较乱。如果采用generation模拟倍增，如何更科学一点，必定在小的摇瓶里进行模拟与反应器有较大差别。
2，表达产物稳定性，多少能接受，如何规定比较科学，有同行规定不低于原始细胞株的产量的70-80%，但是我想说的是做稳定性一般都是摇瓶模拟的，每次产量就不同，波动比较大，那就不好说多少代是原始的70-80%，能否像我说的就规定不低于多少即可。从我上传的文献可以看出不同点的specifica productivity范围挺大，如何表示更科学一点，也许你原来定的原始的表达量为10mg/ml，之后可能某次都15mg/ml了。所以想知道大家是如何规定产物稳定不稳定的。

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