色谱分析工作者在进行色谱方法开发时，首先需要执行的步骤是分析方法的调研。在大量阅读和接触色谱分析方法或者分析标准时，往往会观察到分流比与色谱柱之间的对应关系，基本结论是这样的——色谱柱内径越小，合适的柱流量越低，合适的分流比越高；色谱柱内径越大，合适的柱流量越大，合适的分流比越小。

这样设定色谱分析条件的原因何在呢？那就特别需要注意一点——进样口的总流量。

我们还是以分流进样为例来说明这个问题。

我们知道分流进样的条件下，样品气化容易产生分流歧视的问题，即不同的组分会发生不同的分流比。例如某个样品含有组分A和组分B，如果是完全不分流方式进样，两个物质的峰面积为1：1；如果采用分流方式进样，两个物质的峰面积比例会偏离1:1，而且分流比越大，峰面积偏离的趋势就越严重。

这就是样品的失真，这种现象一般叫做分流歧视，即样品中不同的组分在分析过程中有不同的分流比。这种现象产生的原因时样品气化的不均匀，样品在进样口内气化的时间越短，或者说样品在衬管中停留的时间越短，这种歧视现象就越严重。

如果色谱系统安装了较大内径的色谱柱（例如0.53mm色谱柱），为了获得较好的柱效，合适的柱流量可能会设定在5ml/min左右，如果此时设定了较高的分流比（例如40），那么样品在衬管中停留的而时间就会过短，可能会导致气化不良，从而产生较为严重的分流歧视问题。

色谱柱流量较大，分流比过大，即系统给出了较大的进样口总流量。

那么反过来说，如果采用较小的总流量，会不会带来较好的分析结果呢？

不是的。

例如某个分析方法使用0.25mm色谱柱，合适的柱流量为1ml/min左右，如果此时设定分流比为5，那么样品在衬管中气化并且进入色谱柱的时间就会相对较长（可能会达到几十秒），即增大了目标物质的起始谱带宽度。

很显然，物质会缓慢的进入色谱柱，那么就有可能物质会缓慢的从色谱柱出口流出，最终得到峰宽较大的色谱峰。

这是色谱工作者不希望得到的分析结果——柱效降低。

那么我们在回想刚才提到的两个案例，如果色谱柱0.53mm内径，柱流量为5，分流比为,10，那么总流量为50（不考虑隔垫吹扫）；色谱柱内径0.25mm，柱流量为1，分流比为40，那么总流量为40/min（不考虑隔垫吹扫）。

这两个分析条件都得到了适中的总流量，样品在衬管中气化的速度不至于过快而导致分流歧视，也不会过慢而导致柱效降低。分析结果可能会相对比较满意。

小结

所以在分流方式进行色谱分析时，分析条件设定时，需要特别注意分流比的设定。

色谱柱内径越大，合适的柱流量越大，合适的分流比越小。

色谱柱内径越小，合适的柱流量就越小，合适的分流比越大。

小结