【求助】救命呀，我的柱子老出问题

cqhxq123456

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2007/12/16 20:49:18 21楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

我们在做完缓冲盐作流动相的样品后,用0.45um微孔滤膜过滤的纯水冲洗(流量不可太大,由低到高逐渐增加,平常做样的流量为1ml/min,冲洗时最高流量不超过0.5ml/min),然后再用5%甲醇水溶液冲洗,最后用纯甲醇冲洗.做样前用5%甲醇水溶液替换掉纯甲醇后,再逐渐增加流动相的流量直至1ml/min.柱子用得还可以.不过要经常换保护柱芯.

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tengyi19781105

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2007/12/17 12:51:35 22楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

你用的缓冲盐浓度比较高,可能是你没有很好的冲洗保养造成的,也可能是你洗柱子的程序有问题,另外你的拖尾现象是你用的缓冲盐的类型不对,或流动相的酸度有问题,通常弱酸性的样品容易出现拖尾现象,一般都将流动相的酸度调到适当的范围来抑制其解离而减少拖尾.
我建议你先用水相比例较大的流动相长时间的冲柱子,再将预柱用超升波处理一下,可以解决你的压力高问题,至于拖尾问题还应该从缓冲盐的类型和溶液的酸度上来改善.
也不知道说的对不对,将就着用吧,呵呵!

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sunchun2008

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2008/2/2 9:48:21 23楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

看了很多朋友的建议，绝大多数是正确的。
主要注意：
1：既然是药典的方法，你的流动相选择应该没有问题，注意所用的所有试剂的纯度和流动相过滤。
2：柱子的柱效迅速降低，多是由于样品的净化问题，大量的不可逆吸附物堆积在柱中所至。注意样品的前处理，比如用预处理小柱纯化。
3：每天分析完成后，先用纯水冲洗；再用高比例的甲醇/水（最好用乙腈/水）冲洗并保存。水是洗脱盐类；高比例乙腈/水是洗脱残留在柱中的强保留的杂质。
4：至于是否使用保护柱的问题，仁者见仁，智者见智，但有一点是肯定的；加了保护柱会损失很大的柱效，峰形变宽。如果分离多组分或难分离的两个组分，千万不要加保护柱。可以在进样前净化一下样品（预处理小柱）。另外保护柱价格很高，您只有在保护柱/预处理小柱/分析柱的成本核算及预期分离效果之间做选择。
5：组分峰分叉是常见的问题，牵扯的原因有以下几点：所用的柱子质量差，填充的不紧密，使用在高压下会逐渐被压紧；再好的柱子使用一段时间后也会出现塌陷，如果您的操作习惯正确，不会出现分叉，否则就会出现分叉。最关键的是要注意在系统中的压力没有降到大气压是，千万不要使系统突然泄压。理由很简单，正常时柱头的压力永远高于柱末端，突然泄压时柱末端的压力高于柱头，造成什么结果？填料会将柱头的塌陷填平，而在柱子的中间形成断层空间，一根柱子分成了两根或者三根。第二天您开机再分析时，组分带就会被这两根柱子分开，形成分叉也叫双峰，而且每个峰都是双峰。解决有两种方法：换新柱子并且纠正自己的操作习惯；将柱子反过来在系统所能承受的最大压力（加大流速）下反洗，一段时间后再将柱子正过来，压力以很慢的速度往上升（流速一点一点升高）直到系统所能承受的最大压力。这样肯定能解决双峰问题。

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