1.目的

保证在QTRAP5500 nano源下，用注射器进行正确的调源

2.责任

设备负责人应根据维护计划定期对QTRAP5500进行离子阱质量校正；

所有操作人员必须严格按照本操作规程所规定操作；

3.实验原理

特征峰的强度表征仪器的灵敏度。

4.操作步骤

4.1 Q1（推荐的调源方式）

4.1.1进入Analyst软件界面，双击Manual Tuning；

4.1.2打开调源的文件，进Glu-Fibrinopeptide B的终溶液（浓度50fmol/μl），选择

，勾上use（

），设置

，选择流速为300nl/min（500nl/min）；

4.1.3改变喷针的位置优化信号强度，注意喷雾不要太靠近orifice，改变heated interface的温度，优化信号和降低背景噪音，另外，可以调整CUR、IS和GS1；

4.1.4一旦出现了稳定的喷雾，进行Q1扫描5分钟，同时观测喷雾的稳定性，良好的状态是：在TIC窗口中起伏很小，并且噪音峰也是很低、很短暂的；

4.1.5接着，用MCA方式采集10个Cycles，保存数据：Sample Name: Q1 scan ，Data File: QTRAP system Nanospray Test <DATE>；

4.1.6打开数据文件，放大m/z为786的峰（View -> Graph Info Window），看intensity是否达到3e6；达到后则记下喷雾与源气参数，此时的灵敏度为最优。

4.2 EMS（紧接Q1）

4.2.1打开调源的文件，切换到EMS扫描模式，按表1，设置一些参数，其它值先按经验值设置；

4.2.2调整源气参数或源的位置，按表2看主要的特征峰是否出现,一旦喷雾稳定，保存数据：Sample Name: EMS scan ，Data File: QTRAP system Nanospray Test <DATE>；

表1

Tab	Parameter	Setting
MS	Scan type	Enhanced MS(EMS)
	Polarity	Positive
	MCA	Select checkbox
	Start(amu)/Stop(amu)	400.000/1000.000
	Optimize Masses	Click button
	Number of scans to sum	1
	Cycles	10
Advanced MS	Scan rate(Da/s)	10,000
	Fixed LIT fill time(ms)	0.5ms
	Q0 Trapping	Deselect checkbox

表2

（M+nH）n⁺ monoisotopic m/z for charge of Glu-Fibrinopeptide B
+1	+2	+3	+4	+5	+6
1570.6768	785.8421	524.2305	393.4247	—	—

4.2.3 m/z为786的峰，intensity需达到3e6。

4.3 EPI

4.3.1 打开调源的文件，按表3，设置一些参数，其它值先按经验值设置；

表3

Tab	Parameter	Setting
Resolution	Q1 Resolution	Unit
MS	Scan type	EPI
	Polarity	Positive
	Product Of(amu)	785.9
	MCA	Select checkbox
	Start(amu)/Stop(amu)	100.000/280.000 275.000/1000.000
	Optimize Masses	Click button
	Number of scans to sum	1
	Cycles	10
Advanced MS	Scan rate(Da/s)	20,000
	Fixed LIT fill time(ms)	10
	Q0 Trapping	Off

4.3.2按表4看主要的特征峰是否出现；

表4 Theoretical fragment ions of Glu-Fibrinopeptide B

b ions		y ions
(m/z)	Fragment	(m/z)	Fragment
—	—	1570.6768	EGVNDNEEGFFSAR
130.0499	E	1441.6342	GVNDNEEGFFSAR
187.0713	EG	1384.6128	VNDNEEGFFSAR
286.1397	EGV	1285.5444	NDNEEGFFSAR
400.1827	EGVN	1171.5014	DNEEGFFSAR
515.2096	EGVND	1056.4745	NEEGFFSAR
629.2525	EGVNDN	942.4316	EEGFFSAR
758.2951	EGVNDNE	813.3890	EGFFSAR
887.3377	EGVNDNEE	684.3464	GFFSAR
944.3592	EGVNDNEEG	627.3249	FFSAR
1091.4276	EGVNDNEEGF	480.2565	FSAR
1238.4960	EGVNDNEEGFF	333.1881	SAR
1325.5281	EGVNDNEEGFFS	246.1561	AR
1396.5652	EGVNDNEEGFFSA	175.1190	R
1552.6663	EGVNDNEEGFFSAR	—	—

4.3.3按表5看主要的特征峰（不需要全部的峰都出现）的Intensity是否接近或达到说明书的示范图的指标；

表5

m/z	246.156	333.188	480.257	627.325	684.346	813.389	942.432
Intensity	7e⁵	4.1e⁶	4.0e⁶	1.5e⁶	7.0e⁶	4.0e⁶	2.5e⁶

4.3.4调源完成后，保存数据，不保存方法。

5.质量标准与评估

质量指标名称	质量指标	测量方法
m/z为786的intensity	≥3e⁶	Q1 scan
m/z为785.8的intensity	≥3e⁶	EMS scan

6.参考文献

AB SCIEX QTRAP

5500 System Installation Guide

7．注意事项

7.1如果特征峰的intensity太低，用Q1扫描模式调整nano源的条件保证达到最佳的位置、针尖突出长度以及源气参数；

7.2如果S/N太低，调整源的条件保证达到最佳的位置、针尖突出长度以及源气参数，若注射器注射过其他样品，应在实验前用新的样品清洗一下注射器。

7.3调源时须注意带乳胶手套，以免高压触电；

7.4仪器正常运行时，禁止接触离子源和打开离子源盖，避免受到高温、高压和激光伤害；

7.5仪器停止工作后半小时内，禁止接触离子源，避免受到高温的伤害；

8.附录

附录A：实验仪器设备

附录B：实验试剂和耗材

附录C：试剂配制方法

附录D：修订记录表

附录A实验仪器设备

仪器名称	型号	厂家
QTRAP5500	QTRAP5500	AB SCIEX

附录B实验试剂和耗材

试剂

试剂名称	型号	厂家
乙腈	HPLC 4L	Fisher Chemical
纯水		millpore
甲酸	HPLC 50ml	迪马
Glu-Fibrinopeptide B	100μg	AB SCIEX

耗材

耗材名称	型号	厂家
离心管	1.5ml	爱思进
枪头	10μl、200μl、1000μl	爱思进
注射器	一体100μl，内径1.46mm	迪马

附录C 试剂配制方法

1.1储液：向100μg Glu-Fibrinopeptide B的瓶内加入600μl×2（共1200μl）的标准稀释液（0.1% 甲酸，30%乙腈），浓度为50pmol/μl,涡旋震荡至少2min，稍微离心使液体至管底，分装后，-20℃保存；

1.2终溶液：1μl的储液用0.1%FA稀释成1000μl，即终浓度为50fmol/μl，涡旋震荡至少30s，离心至少10s使液体至管底，4℃使用，使用时间为3天