主题：【分享】高效液相色谱方法验证篇|关于准确度考量的小知识

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发表于：2024/10/21 09:50:08 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

今天继续讲一下液相分析方法验证相关的一些小知识，并结合最新的ICH Q2的要求，方便大家在新的指导政策下把方法验证做的更加完善。之前已讲了方法验证中准确度的概念（详见https://bbs.instrument.com.cn/topic/8409823 高效液相色谱技能篇|关于方法验证中常见几个概念的小知识），这里就不做过多的描述。
01.准确度的验证方法
ICH Q2原文：

1）对照品比较：使用已知纯度的对照品进行测定，比较分析结果与对照品的标示值。
2）加标回收试验：在样品中加入已知量的目标分析物，然后进行测定，计算回收率。
3）正交方法比较：将分析方法的结果与另一成熟且准确度已知的方法的结果进行比较。
02.准确度的数据要求
1）回收率：可接受范围通常一般为90%至110%；一些特殊的方法可以适当放宽范围。
2）重复测定：至少需要在三个不同浓度水平上进行重复测定，以确保结果的代表性和可靠性。
03.准确度的实验设计
1）浓度水平：在验证准确度时，应选择至少三个不同的浓度水平（低、中、高），以覆盖方法的工作范围。
2）重复测定：每个浓度水平应进行多次重复测定，通常建议每个水平至少进行三次重复测定。
04.准确度的结果评估
1）统计分析：使用统计方法评估测定结果的准确性，如计算平均值、标准偏差和相对标准偏差（RSD）。
2）偏差评估：评估测定值与真实值之间的偏差，确保偏差在可接受范围内。

ICH Q2指导原则中，如何确定分析方法的可接受准确度范围？

答：根据实验设计确定3个不同浓度，每个浓度配制3份样品，至少测定一次。计算已知加入量的回收率及回收率的RSD（相对标准偏差）。回收率应在一定范围内，如95.0%~105.0%之间，RSD应满足特定标准，如≤2.0%。

根据实验结果，判断回收率和RSD是否满足预设的接受标准。若满足，则说明分析方法的准确度在可接受范围内。

如果回收率不满足要求，可能表明分析方法存在问题或实验条件需要优化：

①.分析评估：

首先，应分析回收率不满足要求的原因，可能包括仪器误差、操作不当、样品不稳定等。

②.优化实验条件?：

a. 调整实验参数：重新评估和优化实验条件，如流动相组成、pH值、柱温和流速等，以提高方法的准确度。

b. 改进样品制备：检查和改进样品制备过程，确保样品的均匀性和稳定性，减少样品制备过程中的偏差。

③.重新评估线性和范围

重新评估分析方法的线性和范围，确保准确度验证在方法的有效范围内进行。

④.仪器误差

使用的仪器本身不够精密，如未经校正的容量瓶、移液管等，可能导致测定结果与实际结果偏差?。

综上所述，要提高回收率，需要从实验方法、仪器精度、人员操作以及样品稳定性等多个方面进行综合考虑和优化?。

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