主题:【求助】HPLC中不解处

浏览0 回复24 电梯直达
syxin
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
本人的流动相在回零后,其基线很不平,选用的流动相为甲醇:0.4%乙酸水

其噪音很大,我换了其它波长,虽然基线很平,但是样品峰不明显了

我需要换其它流动相吗

新的问题:
本人在上样后,色谱图中没有峰,是么原因???
syxin
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
本人是新手,在做HPLC上样时,用的是手动进样阀,资料上说使用程序是这样的:
  逆时针至LOAD  然后加样,顺时针转到INJECT ,同时按下电脑软件中的 YES(确定批处理加样),本人的问题是
1、其LOAD与INJECT的时间如何把握,间隔又是多少
2、在进样阀处于LOAD(上样)时,柱压为52Bar  而处于INJECT时,柱压为
160Bar  这会不会影响我的结果
lzh4120
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
你的问题不在流动相,而在仪器本身。紫外检测器用的是氘灯作光源,理论上讲氘灯光谱可以低到190nm,但实际上低于210nm时就很难用了,具体表现就是你已经看到的:基线噪声很大(灵敏度必然也就很低),且测定结果精密度很差(因而无法进行加标回收等内控操作)。如果一定要用HPLC法,建议先对目标组分进行紫外吸收扫描,找出其它最大吸收波长(一种组分一般不会只有一个)进行测定。
lzh4120
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
原文由 syxin 发表:
本人是新手,在做HPLC上样时,用的是手动进样阀,资料上说使用程序是这样的:
  逆时针至LOAD  然后加样,顺时针转到INJECT ,同时按下电脑软件中的 YES(确定批处理加样),本人的问题是
1、其LOAD与INJECT的时间如何把握,间隔又是多少
2、在进样阀处于LOAD(上样)时,柱压为52Bar  而处于INJECT时,柱压为
160Bar  这会不会影响我的结果


1.LOAD后宜尽快INJECT,以免渗漏等造成定量误差。
2.由LOAD转向INJECDT时动作应快速干脆,以免流路压力快速升高导致停泵。
3.你在LOAD与INJECT之间转换时柱压波动过大,疑有气泡进入六通阀(进样阀)。
syxin
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
这么说我以后应该尽快完成该操作

另外的我基线老不平,持续下降(基本上成直线)
这是不是上述原因造成的呢
syxin
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
每人奖励2分

为答谢广大朋友的帮助.现将HPLC基础与实践资料发于网上
如果感兴趣可以收下

HPLC基础与实践
flying_fish
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
原文由 hpt2005 发表:
不同溶剂有不同吸收峰,设计方法时得考虑测定波长与选取溶剂。


就是,所以说做东西使用低波长很麻烦的。我们用的一般是乙腈和水,这样在低波长下稍好一些。
而且空白很重要,积分是一定要扣空白阿
syxin
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
楼上的学者你好
积分是一定要扣空白,可是在软件上没找到呢

还有,本人在换上其它流动相后,其基线老是往下方飘移,怎么办???
tanggangfeng
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
原文由 syxin 发表:
本人是新手,在做HPLC上样时,用的是手动进样阀,资料上说使用程序是这样的:
  逆时针至LOAD  然后加样,顺时针转到INJECT ,同时按下电脑软件中的 YES(确定批处理加样),本人的问题是
1、其LOAD与INJECT的时间如何把握,间隔又是多少
2、在进样阀处于LOAD(上样)时,柱压为52Bar  而处于INJECT时,柱压为
160Bar  这会不会影响我的结果

LOAD与INJECT切换原则越快越好,但不要为求快,用力过猛,这样很容易把手动进样阀能坏。

LOAD与INJECT切换后压力从52上升到160,应该是六通阀堵。你可以试试。不要进样,从LOAD切换INJECT,看看压力是否正常。如果正常应该是气泡,如果上升,你用溶剂冲洗下。用买仪器时送的大针筒用各种有机溶剂冲洗下。一般可以冲洗干净。

tanggangfeng
结帖率:
100%
关注:0 |粉丝:0
新手级: 新兵
原文由 syxin 发表:
楼上的学者你好
积分是一定要扣空白,可是在软件上没找到呢

在数据分析哪里,图表示上下两个峰的。可以加 也可以减

还有,本人在换上其它流动相后,其基线老是往下方飘移,怎么办???


如果基线不稳一般是流动相还没平衡。尤其在低波长出。如果是等度可以先混合在走流动相,可能会好点。

猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐
品牌合作伙伴