【求助】如何改变TLC展开剂以达到硅胶柱最佳分离?
最近在研究TLC条件,以达到活性组分在硅胶柱上的较好分离。直接将TLC条件用于硅胶柱分离不是很理想。网上朋友建议我讲TLC展开剂的溶剂强度降低30~50%然后上柱。我的问题是:如何才能达到将溶剂强度降低?是采用加入强度更低的溶剂来调整吗?还是有其他办法?请大家帮忙!
首先,TLC的一个重要的作用就是为层析时选择合适的洗脱体系,和合适的洗脱比例。一般来讲,如果要将TLC中合适的洗脱比例用于柱层析时,一般应该适当减小洗脱强度,所以所谓降低30~50%,是有道理的。如何降低了,当然一般是调节洗脱液的比例,在使用TLC时,一般来讲,是很少用一元体系来展开,特别是对于成分较为复杂的化合物,几乎是不可能。通常来讲一个展开体系,包括由两部分组成,一部分:基本展开体系(包括极性大的试剂,极性较小的试剂。其中,极性较小的部分一般起到分离的作用,极性较大的试剂一般起到帮助化合物在薄层上移动,对分离物质的洗脱能力较强,可以提高比移植,但不能提高分辨率。二部分:展开剂中加入酸或碱,主要是抑止某些酸或碱性物质而产生斑点的拖尾。(至于如何产生的拖尾,如有兴趣,下次可以在将)。讲到这里,我想你应该明白就是调节基本展开体系的溶剂的比例即可,换言之,增大小的比例,或减小大的比例,这都是相对的。真的不说了,有些困了!
混合溶剂的溶剂强度与组成溶剂所占的体积比相关,可通过介电常数或其它常数来计算。柱层析时还是以配制后用TLC验证Rf值为好,分离斑点之间Rf值相差较大时,将Rf值调节在0.2左右,梯度洗脱;斑点相距较近或呈念珠状相连时,将主要斑点Rf值调至0.15至0.2之间为好。Rf值太小,柱上洗脱时间较长,谱带扩散较严重;Rf值太大,洗脱平衡不充分,也难于分开。感觉斑点的洗脱体积与其Rf值有近似倒数的关系,Rf为0.1时,需10个保留体积来洗脱;Rf为0.3时,需3个保留体积洗脱;一般斑点在7或8个保留体积洗脱时,效果最好。
【求助】关于甾族的显色问题
在点板后,用AcOEt:石油醚2:1跑后,用碘缸,高锰酸钾,三氯化锑显色发现都是一显一片,拖尾的厉害,哪怕再稀释也是。也用过磷钼酸,倒是好使,但是有点贵,而且也有上述的情况,只是改善了些。稀到后面连产物点也很淡啦!这可怎么办啊?大家帮帮忙吧!
从你描述的现象大致判断是你分离的部位太杂及你的展开系统又不是太好造成的,具体分析如下:
1.碘缸是通用的显色剂,一般的物质都可以显色;高锰酸钾的氧化性比较强,绝大部分有机物都可以被氧化的,所以这两种显色剂显色成一片说明你的展开系统不太好;
2. 在你用磷钼酸后有改善,那是因为磷钼酸的选择性稍好,它是种氧化性的显色剂,说明你的部位太杂了,需要进一步处理;
3.而三氯化锑对含有共轭多烯的结构才显色,而你在用三氯化锑显色也是显成一片,只能说明你的显色操作不是很规范或者是分子种这类物质很多了(有可能吗 ,查查)
所以你首先需要进一步优化色谱条件;由于没有看到你的色谱板,但你是用AcOEt:石油醚2:1展开,所以也有可能是含有很多色素造成的。
【求助】过常压柱子时,为什么过柱过程中柱子内会有气泡,怎样避免,遇到这种情况应该怎样处理?
朋友,您怎么也不说是什么柱子?若是硅胶柱,还没有上样的话,可以搅一搅,让其自然沉降就可以;若是已经上了样品,就只好加压赶赶气泡试试。若是大孔树脂柱或者是葡聚糖凝胶柱,在换溶剂的时候由于树脂颗粒在水中和醇中的溶胀系数不同造成有气泡产生,所以换比例的时候可以跨度小一点,或者在柱子中气泡太多,造成断层等影响进一步分离的时候搅一搅,对分离效果不会有太大的影响。
一般过硅胶柱如何避免产生气泡:
1.装柱之前应搅拌均匀,然后装柱;
2.装柱尽可能一次性的装完,
3.过柱的时候,你是否干过柱,这也会产生气泡;
4.还有你在装完柱后,最好在硅胶上方加一片圆形滤纸,加上后再加一块棉花,这样加溶剂冲洗时,可以避免冲起硅胶,产生气泡;
如果气泡已经产生,可以:
1.加压驱赶气泡;
2.我自己也发现了一个方法,你试试,就是先不要冲洗,放置过夜,第二天早上气泡就会到了上面,不过有的时候不行。
3.如果还不行,就用高极性的溶剂冲下样品,收集,重新装柱。
湿法装柱要点:
1.估算柱子硅胶用量
2.估算溶剂与硅胶混合量
3.将溶剂与硅胶于烧杯中搅拌均匀,应搅至无气泡
4.用漏斗装柱,尽可能一次性加完.
5.反复加溶剂平衡柱子,至柱床不再下降为止。
6. 加样有两种方法,可溶于以上溶剂的样品,可用适量溶剂溶解后,将溶剂放平柱床后直接加样;还可用适宜溶剂溶解样品,用适量硅胶拌样,硅胶量以能分散样品即可,尽量少,以减小初始色带,加样时,柱床上留少量溶剂,加样后,应轻敲柱子样品带的四周,使气泡上移,样品带上加棉花或盖少量硅胶,防止加溶剂时冲动样品层,加好样后连续冲柱时间尽量长些,至少10小时以上,可基本消除气泡的产生。
另外加液时应先用滴管沿柱壁慢加,等有一定高度后改容器加液。
我认为可能是由于因为:
1,可能是天气太热,溶剂挥发产生气泡。
2,极性变化很大,造成硅胶和溶剂摩擦放热产生气泡。
3,就是你的样品曾态粘稠,使内外气压不等,所以进去气泡了
关于TLC的有关问题
请问:1.我在做薄层鉴别时,前沿不是往下凹就是向上凸,这是为什么呢?
2.TLC鉴别时,色素会不会有影响呢?
谢谢大家指教!!!
建议楼主将你的问题、样品、TLC条件、展开剂配制过程说得具体一点。
一般,如果是×××溶剂和水的饱和溶液作为展开剂;或者展开剂中含有一定量的水,可能出现楼主说的问题。而且,千万别出现本来应该取上层液,却取成了下层液的尴尬情况(这不是没有出现过的)。
然后,请楼主确定班子活化程度、饱和时间。饱和时间长点会有效克服一些展开剂前沿的边缘快、中间慢的情况。
色素看是哪种,也要看你的样品本身和色素的相互作用情况了。一般,你可以用活性炭将色素吸附掉。
试试看了!!!
momo198179 wrote:
请问:1.我在做薄层鉴别时,前沿不是往下凹就是向上凸,这是为什么呢?
2.TLC鉴别时,色素会不会有影响
1.常用的两相展开剂,如果两种溶剂的极性相差较大,容易两边跑得快中间跑得慢,如果你是这种情况导致的前沿往下凹,可以多饱和一会或者在展缸四周放上浸入展开剂的滤纸条,效果可能好一些。
呢?
2.如果是大量的色素在上柱之前应该脱一脱比较好。
momo198179 wrote:
请问:我是将树脂柱洗脱下的皂甙成分进行色谱鉴别,因为所用的是两种不同的吸附树脂,而且洗脱下来的颜色是不一样的,因此相鉴别一下,含量是否相同,故涉及到色素是否影响
鉴别的是含量的话可以用分析的
液相看看;如果只是看成分是否一致直接用薄层就可以了,在三个不同的展开系统里颜色和Rf值均一致就肯定是一个成分了。这样的时候,可以调节展开剂的极性,把色素和你的东西分开不叠在一起就可以了。