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液相色谱（LC）

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主题：【求助】关于液相色谱法测定β－胡萝卜素的流动相的问题

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发表于：2008/02/19 17:21:33 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

我用国标《GB/T 5009.83-2003 食品中胡萝卜素的测定》中液相色谱法测β－胡萝卜素，但出峰时间太长了，我试着加大了乙腈对甲醇的比例，不过效果不是很理想，看了一些参考文献，但好多都没告诉我出峰时间，我也不想一个一个的试了，所以请问哪位大侠有出峰时间短的流动相配方阿？帮偶一把吧！

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2008/2/19 19:16:53 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

按照国标应该比较好吧。
不知道你用什么柱子，流动相是什么？要缩短目标物质的保留时间，可以提高流速（注意压力不要过高），或者根据流动相组分的不同极性适当改变，如果是反相色谱增大强极性组分就可以了。或者你用梯度洗脱来加快分析速度。

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abcde

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2008/2/19 19:21:21 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

流动相与色谱柱有关, 你要注意样品中会有a－胡萝卜素,与β－胡萝卜素很难分离

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Easy-Boy

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2008/2/20 9:15:57 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

一般情况下，加大乙腈比例会使得出峰时间缩短。

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2008/2/20 11:17:22 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

我已经把乙腈和甲醇的比例调成1：1了，可出峰的时间依然是50min多，之前我把乙腈和甲醇的比例调成2：8的时候，也是50min左右出峰

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Last edit by tianyu19850402

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2008/2/20 15:19:22 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

今天我把乙腈和甲醇的比例都调到了9：1，流速是1.8ml/min，出峰时间也没有变短，问题究竟出在哪里呢？

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色色猪

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2008/2/20 16:52:43 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

b-胡萝卜素我也做过，流动相：乙腈+甲醇=1+1，柱子：安捷伦碳18柱，150mm，流速2.0mL/min，标准出峰时间大概是18~20分钟，如果你想加快出峰时间，可以试着把柱温箱的温度调高。你的出峰时间那么长，用的是250的柱子吧，换根短的试下

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2008/2/20 17:25:24 7楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

谢谢楼上的大哥！
我的柱子是KR100-5C18，的确是250mm的，可我目前没有可替换的柱子……
而且液相色谱仪也没有柱温箱……

令人郁闷阿！

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bessy

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2008/2/23 5:14:07 8楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 tianyu19850402 发表:
我用国标《GB/T 5009.83-2003 食品中胡萝卜素的测定》中液相色谱法测β－胡萝卜素，但出峰时间太长了，我试着加大了乙腈对甲醇的比例，不过效果不是很理想，看了一些参考文献，但好多都没告诉我出峰时间，我也不想一个一个的试了，所以请问哪位大侠有出峰时间短的流动相配方阿？帮偶一把吧！

β－胡萝卜素出峰时间是22分，也是用250mm柱.

下面这篇文章里有具体的操作方法，你可以看一下。对你一定很有帮助。
Development and evaluation of an HPLC method for the analysis of carotenoids in foods, and the measurement of the caroteniod content of vegetables and fruits commonly consumed in the UK -------Food Chemistry 54(1995) 101-111

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