原文由 柏坡(hgycook) 发表:
在反相高效液相色谱分析中,选择正确的缓冲液PH值,对可离解的化合物分析的重现性十分必要,如果PH值不恰当可能导致不对称峰,宽峰,分裂峰,或肩峰,为能在定量分析中获得低的检测限,两次分析之间较低的相对标准偏差(RSD)和保留时间的重现性,尖锐的,对成的峰很必要,我们将讨论在使用缓冲液时如何选择缓冲液的PH值,以及如何选择正确的缓冲体系。
什么时候需要缓冲溶液?
在反相色谱分析中,流动相的PH值一般在2.5-7之间,当分析物在反相条件下可离解,或样品的PH值在2.5-7之外时,就需要缓冲液,在反相条件下可离解的化合物一般有氨基和羧基,他们的Pka在1-11之间,选择正确的缓冲液PH值可保证可离解的官能团处于一种形式,离子形式或中性化合物的形式,如果样品的PH值对柱子有伤害,则缓冲溶液可使其变温和或减小其危害,
如何选择缓冲液PH值
在选择缓冲液PH值之前,应先了解被分析物的Pka,高于或低于Pka两个单位的值,有助于获得好的或尖的峰,从HH公式得知,溶液PH值高于或低于两个Pka两个单位,化合物99%以一种形式存在,而一种形式存在的化合物才能获得好的尖锐的峰。
一般选用磷酸盐做缓冲液。