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主题：【第三届原创大赛+极限体验】一次幸运的调试记录

浏览0 回复151 电梯直达

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发表于：2010/09/20 08:19:42 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

该帖子已被samanthalas设置为精华；

维权声明：本文为xiaoguodong原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。

外面的骄阳炙烤着大地，工厂也在如火如荼的上马着新产品，老总还管闲事的从别处拿来了一个外来样让调试新方法。这是邻厂的产品，老总和邻厂的老总是朋友，哎……….

此样品为白色结晶粉末。老总拿样品来时说是作原料药用的，含量98%左右。虽然心里一万个不愿意，可还是得去做。厂家没提供方法，仅告诉检测波长为220nm，但有一张谱图，先把谱图给大家看，从谱图上显示主峰是在17.3min左右，异构体在16.0min左右出峰。

原创许愿：电磁炉

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2010/9/20 8:20:20 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

由于没有现成的方法，所以第一步是找到一根合适的色谱柱，从厂家提供的谱图中看出主成分的保留时间在17min左右，初步分析应该是一根250mm的色谱柱，但7-14min这段时间没有组分流出，并且16min前组分分离度都比较好，就决定用一根150mm的色谱柱试试，如果主成分分离不好可以试试梯度洗脱。有了大概的思路后，就从现有的色谱柱里寻找色谱柱来进行调试。刚好两个月前才在月旭购买了一根SB-C18 3um*4.6*150m的色谱柱，就用它了，HPLC选择了岛津的LC-10AT N2000工作站说动手就动手，那就先用甲醇和水去试试吧。检测波长就用紫外进行了全波长扫描，确实在220nm左右吸收波长比较大，因此检测波长确定在220nm。

以下是分析条件
流动相为甲醇：水（体积比50ml:50ml）
流动相稀释样品
进样量：20ul
分析时间：60min
柱温：(℃)25
检测波长：220 nm
流速：1.0ml/min
类型：恒流
检测器：紫外

从峰型上看这种方法肯定是不可取了，保留时间是提前了，可拖尾这么严重。下面的工作是如何改变拖尾峰的问题了，曾经看到月旭版面介绍分析方法中提到用酸和碱可以改善峰型，那么就加点三乙胺和冰乙酸看看会不会有所改变。

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2010/9/20 8:27:34 Last edit by xiaoguodong

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2010/9/20 8:21:21 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

重新改变流动相的配制方法

甲醇：水：三乙胺：冰乙酸 50ml: 50ml：0.1ml：0.1ml 样品用的还是原先配制好的样品，其余条件不变

明显优于先前的方法，看来有门

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2010/9/20 8:22:59 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

流动相的比例小动了一下

甲醇：水：三乙胺：冰乙酸40ml：60ml：0.1ml：0.1ml

出峰时间推迟太多，不是我想要的效果，比例动了10%，保留时间却推迟了很多，看来流动相比例对这个样品的保留时间有很大的影响，缩小调动比例。

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2010/9/20 8:25:03 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

再次改动流动相

甲醇：水：三乙胺：冰乙酸45ml：55ml：0.1ml：0.1ml

出峰时间差不多了，可多了这么多杂质峰，一直是在用同一个样品进样，怎么会发生这么大的变化呢？想到以前分析一个代加工样品，含量一直不稳定，后来对分析数据进行统计，发现在夜间分析结果比较稳定，得出结论样品见光分解，后来检测时关窗帘，用黑色容器处理样品，及时分析，结果就比较稳定了，这难道也是样品不稳定。

重新配制样品50%的甲醇溶液稀释样品进样，看和厂家提供的谱图是不是很挺像的。

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2010/9/20 8:26:48 Last edit by xiaoguodong

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2010/9/20 8:26:22 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

总结一下：这次方法调试总得来说比较顺利，也可能是运气比较好，碰对了。下次碰到类似问题，首先要确定检测波长，波长不正确很难保证数据准确，导致误判。

其次流动相的选择能用甲醇不用乙腈，呵呵从成本考虑，以前也听说先用100%的甲醇先走一遍，看看保留时间，再慢慢调整，这次首先看到客户的谱图组分的保留时间比较散，用100%甲醇肯定不行，所以用了50：50的比例，然后看保留时间再进行调整。

再次，峰型不好可以添加一些酸或碱调整峰型。

最后一点就是要看样品重复性、稳定性，采取相应措施来预防，有的样品怕光，有的怕高温，有的固体稳定，液体不稳定，必须找到使样品分析结果又很好的重复性的方法才行。

以上是本人的个人看法，也许有不对或一知半解的地方，请各位专家指正为好。

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