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主题：【第三届原创参赛】分离纯化——水层分离的经验小结

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baowzh
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发表于：2010/09/28 19:43:19 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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分离纯化——水层分离的经验小结


一．水层样品的特点：

1．溶解度差（也有例外）。随之而来的后果就是上柱子，进液相时样品难溶解的问题。

    解决：可以加适当的DMSO，但是量不能大。而且是在样品干燥的情况下加少量的DMSO，然后加入其他的溶剂。不能是在有其他溶剂存在的情况下加DMSO，这样不会有好的效果。而且在做制备液相时，加DMSO一定要慎重。

2．保存难。由于含水，容易发霉，即使在冰箱里，时间长了，也会发霉。

    解决：水尽可能少。对于近期内不做的样品可以加入正丁醇，在冰箱内保存。

3．化合物结构新颖，一般连糖，出新率高。

4．含鞣质和多糖类比较多，可以采用大孔，铅沉法等除去。

二．分离手段

水层的一般分离流程：先大孔，再聚酰胺，再开放ODS，最后制备液相。

这个流程也不是必须要走的，要根据自己的实际情况来决定。

1．大孔树脂

    用大孔树脂砍段不用太细，砍成几个部分就行。

2．聚酰胺

    在上聚酰胺前一定要点板，看看有没有死吸附的情况，以及选择正确的洗脱系统。聚酰胺一般情况下是用甲醇/水，乙醇/水，但是不要放弃氯仿/甲醇等正相系统，有时候氯仿/甲醇系统的成点性非常好。

3．开放ODS

    对于水溶性好的样品，可以直接上样，也可以加入少量的甲醇，影响不大。水溶的不好的可以拌样。

    换梯度不能用颜色的深浅来判断，不能用一个梯度洗的没颜色了才换下一个梯度。在不断的洗脱下，下一个梯度的样品有可能已经洗脱下来。可以一个梯度跑3，4个体积后就换下一个梯度，两个梯度交叉的部分可以接到一个锥形瓶里。

4．高效液相色谱（反相）

    一般用甲醇/水，但是对于峰型不好的可以试一下乙腈/水系统，常常会有意想不到的效果。乙腈很贵，用重蒸过的分析乙腈就可以。

5．硅胶

        对于水层样品来说，由于极性较大，一般不推荐使用硅胶。但是总有一些样品，液相聚酰胺凝胶等手段都没有效果，只好使用硅胶，对于极性较大的水层样品来说，一般要用多元展开系统，而且基本要加酸。如果成点性好，可以尝试制备薄层，当然这是在样品量比较大情况下，因为死吸附的情况比较严重。

      对于制备薄层下来的样品洗脱时最好不用甲醇，因为甲醇洗脱能力强，会将硅胶中的一些黏合剂等物质一起洗脱下来，而且没有紫外吸收。上液相分析很纯了，但是打谱的话基本看不到峰。这说明看起来已经很纯的样品里大部分都不是想要的东西，杂质占了绝大多数。我自己就有类似的惨痛经历。对于这种情况，可以将制备薄层下来的样品上一个凝胶柱，效果很好。

      另外就是点板时，样品含水量尽可能少，含水的样品点的点非常大，而且不容易挥干。对于制备薄层来说，划的样品带非常宽。

6．凝胶

    凝胶的特点就是样品损失量小，对于聚酰胺等死吸附严重的或者其他手段分离效果不好的可以尝试。
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kaikaifeng
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2010/9/28 19:56:05 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
好的，辛苦了~
已经设置精华~
另外，希望各个部分的描述，能够更为详细~
用语能够更加专业~

这样，在专家打分环节，才能获得更高的得分，感谢您的参与~
该帖子作者被版主 xiaodu2007693加 2积分， 2经验，加分理由：谢谢建议~！
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kaikaifeng
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2010/9/28 20:02:49 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
对于近期内不做的样品可以加入正丁醇，在冰箱内保存。

我认为，加入甲醇乙醇也是可以的，也不会长霉的~
加入正丁醇，一是气味难闻，二是难以除去啊~
该帖子作者被版主 xiaodu2007693加 3积分， 2经验，加分理由：很有道理~
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baowzh
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2010/9/28 20:03:42 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 环烯醚萜(kaikaifeng) 发表:
对于近期内不做的样品可以加入正丁醇，在冰箱内保存。

我认为，加入甲醇乙醇也是可以的，也不会长霉的~
加入正丁醇，一是气味难闻，二是难以除去啊~


你的建议很好，我会采纳的。
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19861005
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2010/9/28 20:13:43 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
收获很大~
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挥发油
zangweijun1000
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2010/9/28 20:20:35 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
用硅胶砍断的时候我们一般都会先用TLC分析结果来选择一个相对好的结果上硅胶柱，我想知道的是楼主用大孔树脂进行粗砍断的时候是参照什么来进行设置梯度的呢？
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阿三
junqiwudi
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2010/9/28 21:24:10 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主提带含糖 我建议凝胶也可以考虑的
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2010/9/28 21:57:27 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 zangweijun1000(zangweijun1000) 发表:
用硅胶砍断的时候我们一般都会先用TLC分析结果来选择一个相对好的结果上硅胶柱，我想知道的是楼主用大孔树脂进行粗砍断的时候是参照什么来进行设置梯度的呢？


楼主的操作不太清楚~
我以前做过，是按小试的结果来的~
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baowzh
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2010/9/29 8:54:27 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 环烯醚萜(kaikaifeng) 发表:
原文由 zangweijun1000(zangweijun1000) 发表:
用硅胶砍断的时候我们一般都会先用TLC分析结果来选择一个相对好的结果上硅胶柱，我想知道的是楼主用大孔树脂进行粗砍断的时候是参照什么来进行设置梯度的呢？


楼主的操作不太清楚~
我以前做过，是按小试的结果来的~


对，是做放大实验前，先做一下小试，按照小试的结果来选择放大实验的梯度的。
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work037
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2010/9/29 17:37:39 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
不错，楼主还有用过纤维素柱来分离水层样品吗？有什么经验可以介绍的。
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ruby70303
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2010/9/29 19:22:31 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
氯仿/甲醇系统跑聚酰胺柱的话，有需要注意的事项吗？
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